Культуры медленнорастущих НТМБ, подлежащих определению ЛЧ к бедаквилину, получают из респираторного и другого материала пациентов с подозрением на туберкулез и микобактериоз. Выделение проводят общепринятыми культуральными методами на жидких и плотных питательных средах. Идентификацию изолятов кислотоустойчивых микобактерий проводят микробиологическими (культуральные и биохимические тесты) и молекулярно-генетическими методами.
Тестированию на чувствительность к бедаквилину подлежат культуры НТМБ, имеющие клиническую значимость – неоднократно выделенные из диагностического материала пациента с наличием у него клинико-рентгенологических признаков.
Определение минимальных ингибирующих концентраций Bdq в отношении изолятов M. avium, M. intracellularae, M. kansasii и других медленнорастущих НТМБ проводят методом двукратных серийных микроразведений в жидкой питательной среде Мюллера-Хинтона (M-Х) в 96-луночном полистироловом планшете. Для исследований используют порошкообразную субстанцию бедаквилина фумарата (Janssen Pharmaceutica NV, Бельгия), содержащую 82,72% активного вещества.
Делают навеску препарата, которую растворяют в диметилсульфоксиде (ДМСО) с целью получения исходной концентрации Bdq, с учетом активности препарата. Затем методом серийных разведений готовят последовательные двукратные разведения Bdq в ДМСО для внесения в лунки планшета в количестве 5 мкл. При добавлении исследуемой суспензии микобактерий в количестве 200 мкл получаются конечные концентрации препарата в лунках от 0,003 до 2,0 мкг/мл. Суспензию исследуемой культуры НТМБ готовят в среде М-Х с OADC (oleic acid-albumin-dextrose-catalase) по 0,5 стандарту Мак Фарланда, разводят в 100 раз и инокулируют в каждую лунку планшета с препаратом и без препарата - контроль. Планшеты заклеивают липкой пленкой и инкубируют при 37°C в течение 7 – 14 дней. Результаты определения ЛЧ НТМБ к Bdq оценивают с помощью минимальных ингибирующих концентраций – наименьших концентраций препарата, полностью подавляющих видимый рост микроорганизма в лунке при наличии обильного роста в контрольной лунке. Для интерпретации значений МИК, полученных в результате определения ЛЧ к Bdq изолятов M. avium, M. intracellularae, M. kansasii, следует применять предварительные эпидемиологические пограничные значения ECOFF (epidemiological cut-off values) – значения MIC, характеризующие верхний предел для популяции «дикого» типа, установленные в МНПЦ БТ: для M.avium – 0,12 мкг/мл, M.intracellularae – 0,06 мкг/мл , M. kansasii – 0,06 мкг/мл.
Для оценки уровня чувствительности к бедаквилину медленнорастущих НТМБ, циркулирующих в данном (конкретном) регионе, рекомендуется определить собственные ECOFF.