Поскольку базофильные гранулоциты имеют относительно низкие показатели бокового светорассеяния, сопоставимые с таковыми у лимфоцитов и моноцитов, во всех протоколах исследования рекомендовано выбирать зону анализа SSlow для исключения эозинофилов с высокими параметрами бокового светорассеяния.
В наборе FLOW-CAST использованы моноклональные антитела к CCR3 для выделения популяции базофилов (табл.3).
CD193 - CCR3, С-С-рецептор хемокина 3. Это высокоаффинный рецептор для следующих β-хемокинов: эотаксин (CCL11), эотаксин-3 (CCL26), MCP-3 (CCL7), MCP-4 (CCL13) и RANTES (CCL5). Также может связываться с хемокинами CCL4 (MIP-1 β) и CCL2 MCP-1. [78]. Показана экспрессия этого рецептора на базофилах, эозинофилах, а также поляризованных Т-хелперах 2 типа [79].
Комбинация моноклональных антител к CD3/CD294/CD203c в наборе Allergenicity kit предназначена для поэтапного гейтирования базофилов (табл.3).
CD203c является молекулой, принадлежащий к семейству эктонуклеотидпирофосфатаз/фосфодиэстераз 3 (E-NPP3), участвующих в гидролизе олигонуклеотидов, нуклеозидфосфатов и никотинамидаденин-динуклеоти́дов. Экспрессия этой молекулы показана для базофилов, зрелых тучных клеток и их предшественников [80].
CD294 - CRTH2 (Chemoattractant Receptor TH2). Молекула из семейства рецепторов хемоаттрактантов, является рецептором простагландина D2, обеспечивает миграцию и активацию базофилов, эозинофилов, тучных клеток, поляризованных Т-лимфоцитов 2 типа иммунного ответа [81]. Молекула CRTH2 экспрессируется на базофилах, эозинофилах и тучных клетках, минорных субпопуляциях T-клеток и моноцитов/дендритных клеток [82].
CD3 – белковый комплекс, является основным корецептором для Т- клеточного рецептора, необходим для передачи сигнала внутрь клетки [83]. Основной маркер Т-лимфоцитов и тимоцитов. В данную комбинацию включены антитела к CD3 для лучшего выделения чистой популяции базофилов и исключения из анализа Т-клеток 2 типа иммунного ответа, которые экспрессируют молекулы CD294 и CD3.
Комбинация моноклональных антител к CD123/HLA DR в наборе BD FastImmune предназначена для поэтапного гейтирования базофилов (табл.3).
CD123 – α-субъединица рецептора для интерлейкина 3, обеспечивает активацию клеток. Экспрессируется на клетках-предшественниках, дендритных клетках, моноцитах, эозинофилах, базофилах [84].
HLA DR – Human Leucocyte Antigen II – антиген главного комплекса гистосовместимости человека II класса. Участвует в презентации чужеродных пептидов Т-клеточному рецептору Т-лимфоцитов. Экспрессия этой молекулы характерна для профессиональных антигенпредставляющих клеток, например, дендритных клеток, моноцитов, макрофагов, В-лимфоцитов и др., при активации может экспрессироваться на других типах клеток, например, эпителиальных [85]. В данной комбинации маркер HLA DR использован для выделения более чистой популяции базофилов с целью исключения из анализа моноцитов периферической крови, экспрессирующих CD123 и HLA DR.
Анти-IgE – антитела к иммуноглобулину Е. В наборе BASOTEST выделение базофилов проводят на основании выявления клеток, экспрессирующих связанный с мембраной IgE.
На сегодняшний день нет комбинации маркеров для идентификации базофилов, которая была бы однозначно лучшей. Подходящими стратегиями гейтирования могут являться все вышеописанные с учетом их особенностей.