Использование контрастных веществ необходимо для лучшей визуализации при проведении исследований различными методами – магнитно-резонансной томографии, компьютерной томографии, урографии, коронарографии. Для многих из них необходимо использование йодсодержащих рентгеноконтрастных веществ (йРКВ), которые являются химическими модификациями 2,4,6-трийодированного бензольного кольца. В результате введения йРКВ у ряда пациентов развиваются нежелательные побочные эффекты различной природы и тяжести. Согласно данным Kim M.H. с соавт., 2012 [134], частота встречаемости реакций немедленной гиперчувствительности на введение неионных йодсодержащих рентгеноконтрастных веществ составила 2,1%, при этом в 0,01% встречались тяжелые реакции. В Российской популяции [135] частота выявления реакций на йодсодержащие препараты была схожей и составила 2%.
В настоящее время превалирует мнение [136], что многие побочные реакции на йРКВ являются аллергическими и могут протекать в виде разной степени анафилаксии либо отсроченных кожных реакций.
Многим пациентам требуется неоднократное введение йРКВ, например, для мониторинга терапии либо при повторных оперативных вмешательствах. Следовательно, необходимо подтвердить или опровергнуть наличие сенсибилизации к конкретному препарату, а также подобрать безопасное йРКВ. Для диагностики аллергических реакций на лекарственные препараты разрешены [1] кожные тесты, оценка уровня специфических иммуноглобулинов Е, провокационное тестирование. Согласно Tasker F, [137,138], положительные кожные пробы на йРКВ были не более, чем у половины пациентов с документированными реакциями in vivo. Несмотря на то, что провокационные пробы могут достаточно надежно предсказать возможность возникновения аллергических реакций на препараты, они редко используются и в России, и в мире, как выше уже было сказано, из-за высокого риска развития анафилактических реакций [9] при проведении тестирования. Диагностика аллергии на йРКВ с помощью определения специфических иммуноглобулинов Е к основному действующему веществу затруднительна ввиду того, что лекарственная аллергия не всегда протекает по IgE-зависимому 1 типу реакций гиперчувствительности [13], а также данные коммерческие наборы в России не зарегистрированы.
Целью нашей работы было оценить возможности теста активации базофилов методом проточной цитометрии для подтверждения сенсибилизации к неионным йодсодержащим рентгеноконтрастным веществам, а также для выбора безопасного йРКВ у пациентов с отягощенным анамнезом.
В исследование были включены 184 пациента (52 мужчины и 132 женщины, от 29 до 81 года, 62,9±12,6) и 32 здоровых волонтера (12 мужчин и 20 женщин, от 24 до 76 лет, 56,3±14,6). Все пациенты были разделены на 4 группы по анамнестическим данным. 1 группа - 79 человек с местной реакцией на раствор йода или биологически активные добавки с йодом. У этих пациентов была диагностирована, в основном, легкая степень тяжести реакций (в 95% случаев) с симптомами зуда, покраснения, ожога кожи, локализованными уртикарными высыпаниями [139]. 2 группа - 59 человек с системными реакциями на введение йодсодержащих йРКВ (омнипак, ультравист, оптирей, йопамиро, урографин). У этих пациентов была диагностирована, в основном, средняя степень тяжести реакций (в 76% случаев) с симптомами зуда, распирания тканей, генерализованной крапивницей, отеками, в том числе гортани, бронхоспазмом [139]. У 8 пациентов (3 группа) реакция на йРКВ была расценена как токсическая с выраженной слабостью, рвотой, тошнотой, в 1 случае было нарушение ритма во время операции на сердце, у 1 пациента была токсикодермия. Срок давности возникновения реакций на йодсодержащие препараты составил от 2 недель до 40 лет. 38 пациентов, составивших 4 группу, предъявляли жалобы на непереносимость лекарственных средств, не содержащих йод. Все пациенты проходили обследование в связи с предстоящим проведением исследований с использованием йодсодержащих РКВ.
Здоровые волонтеры не имели аллергических реакций в анамнезе, онкологических заболеваний, в момент исследования отсутствовали острые и не было обострения хронических заболеваний.
Тест активации базофилов проводили методом проточной цитометрии (FC500, Beckman Coulter) с использованием набора Allerginicity kit (Cellular Analysis of Allergy, BECKMAN-COULTER) согласно инструкции производителя. Постановку теста осуществляли в течение не более 2 часов от момента забора крови в вакутейнеры с гепарином лития. Идентификацию базофилов осуществляли в многоцветном протоколе с использованием коктейля моноклональных антител (SSlowCD3-CD294+CD203c+), а их активацию оценивали на основании возрастания экспрессии CD203c после стимуляции in vitro. Исследовали 500 базофилов.
Для каждого пациента в тесте оценивали несколько параметров. Во- первых, спонтанную активацию базофилов в пробе с буферным раствором, а именно долю клеток с высокой экспрессией CD203c от общего количества базофилов SSlowCD3-CD294+CD203c+. Во-вторых, для контроля способности базофилов к активации использовали стимуляцию клеток анти-IgE антителами с определением доли клеток с высокой экспрессией CD203c (положительный контроль). В-третьих, оценивали индекс активации базофилов на йРКВ - отношение количества активированных базофилов SSlowCD3-CD294+CD203c+++ в пробе с препаратом к данному параметру в пробе с буферным раствором. В качестве стимулов в тесте использовали 3 препарата – ультравист 300 (163 исследования, действующее вещество йопромид), омнипак 300 (112 исследований, действующее вещество йогексол), оптирей 300 (94 исследования, действующее вещество йоверсол). У 43 пациентов в тесте активации базофилов были исследованы одновременно 2 препарата, а у 19 – все 3. Тест на йРКВ считали положительным при индексе активации базофилов более 1,1. В- четвертых, измеряли относительное количество Т-лимфоцитов 2-го типа иммунного ответа FSlowSSlowCD3+CD294+ от общего пула лимфоцитов FSlowSSlow.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью программ «Microsoft Office Excel 2016», пакета Statistica 12.0 («StatSoft», США). Данные представлены в виде средних значений (M) с расчетом ошибки среднего (m). Сравнение выборок с определением достоверности различий проводили с использованием t-критерия Стьюдента при нормальном распределении, а также с использованием критерия Манна-Уитни при отклонении распределения от нормального. Различия считали статистически значимыми при p<0,05. При проведении частотного анализа использовали точный критерий Фишера (φ). Значимыми считали различия при p<0,05. Чувствительность и специфичность метода оценивали по стандартной методике ROC-анализа.