Ряд факторов могут искажать результат функциональных лабораторных методов, к которым относится и тест активации базофилов. Многие из них подробно были описаны выше в разных разделах, но мы позволили себе сгруппировать их в данной главе для того, чтобы акцентировать внимание на этих важных факторах, значительно влияющих на получение корректного результата теста.
На преаналитическом этапе этими факторами являются прием пациентом глюкокортикостероидов, длительность транспортировки образца с кровью, выбор антикоагулянта.
Показано [107], что прием как местных, так и системных глюкокортикостероидных гормонов, а также использование мазей на основе этих гормонов, снижает реактивность базофилов и, соответственно, чувствительность исследования. Для получения корректного результата теста после глюкокортикостероидной терапии проведение теста рекомендовано не раньше, чем через 2-3 недели. Применение антигистаминовых препаратов не оказывает влияния на результат тестирования [107], поскольку блокирование препаратами действия гистамина на H1-рецепторы по механизму конкурентного ингибирования не предотвращает дегрануляцию базофилов.
Для сохранения максимальной жизнеспособности базофилов рекомендуется проводить анализ активации клеток в период длительностью не более 4 часов после взятия крови [116] (а в идеале – в течение часа), позже происходит снижение их реактивности. Помимо увеличения базового уровня CD203c+++ базофилов в процессе нахождения крови в вакутейнере, что может затруднить интерпретацию данных, Sturm G.J. с соавторами [107] наблюдали снижение специфической активации в тесте с аллергеном при длительном (до суток) хранении пробы.
Для предотвращения свертывания крови желательно использовать в качестве антикоагулянта гепарин [98], как и для других функциональных тестов, потому что он минимально влияет на функциональную активность лейкоцитов и не требует внесения специальных Са-обогащенных буферов.
Как и для других методов лабораторной диагностики, аналитический этап теста активации базофилов значительно зависит от квалификации специалиста в области проточной цитометрии, а также от опыта его работы с коммерческими тест-системами, которые имеют свои особенности в зависимости от используемых в них маркеров для идентификации и оценки активации базофилов. Необходимо производить корректную настройку параметров напряжения и компенсации в рабочем протоколе, а также своевременно осуществлять внешний и внутренний контроль качества на проточном цитометре для уверенности в правильной работе анализатора.
На постаналитическом этапе исследования важным является анализ полученного результата в контексте достоверности и биологической вероятности, включающий оценку влияния терапии, а также сопоставление результата с референтными интервалами. В настоящее время единых референтных интервалов для тест-систем, оценивающих активацию базофилов, не существует. Не разработано отечественных или международных согласительных документов по окончательной стандартизации этого метода, поэтому для каждой лаборатории, проводящей диагностику с использованием теста, допускается [12] вводить свои пороговые значения.
На результат теста активации базофилов влияет острота и тяжесть состояния пациента. При тяжелых острых аллергических реакциях интерпретация теста иногда затруднена, потому что может наблюдаться значительное снижение количества базофилов в периферической крови, как показано для острого периода анафилаксии [116]. Выраженная базопения может привести к статистически недостоверному результату теста, что необходимо указывать в комментарии (рис. 8).
&hide_Cookie=yes)
Рис.8. Бланк выдачи результатов обследования пациента с выраженной базопенией.
Для корректной интерпретации, согласно инструкциям к наборам, требуется оценить не менее 500 базофилов в каждой пробе. Пациенту, особенно с выраженными отеками, может быть рекомендовано проводить диагностику в отсроченном периоде после купирования выраженных симптомов аллергической реакции.
Отдельной проблемой, затрудняющей в некоторых случаях получение корректного результата с использованием данного теста, является наличие в популяции 5-10% «нонреспондеров» - индивидуумов, базофилы которых не активируются поликлональными анти-IgE антителами или (реже) неспецифическим активатором fMLP (обязательный позитивный контроль теста).
Как уже говорилось, у «нонреспондеров» невозможна корректная интерпретация отрицательных результатов в тесте с аллергеном, что необходимо указывать в комментарии к тесту (рис. 9).
&hide_Cookie=yes)
Рис.9. Бланк выдачи результатов обследования пациента-«нонреспондера».
Как и при любом другом методе лабораторной диагностики, специфичность и чувствительность оценки сенсибилизации к аллергенам при помощи данного теста, как правило, не достигает 100%. Во многом это объясняется невозможностью полностью воспроизвести in vitro все особенности аллергических реакций in vivo.