4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ И ВЫВОДЫ

В результате определения генов, кодирующих аминокислотные последовательности основных изоферментов печени, были разработаны и используются фармакогенетические тесты. Важная цель их применения – индивидуальный подбор эффективной и безопасной дозировки ЛС исходя из генетического профиля пациента.

Однако текущий функциональный статус пациента формируется не только под действием генетической предрасположенности, но и под влиянием целого ряда других факторов, в том числе – окружающей среды и индивидуальной изменчивости, которые также необходимо учитывать при персонифицированном медицинском подходе к лечению пациента [43].

Многие исследователи отмечают высокую значимость модификационной или фенотипической изменчивости, приводящей к изменению клинического ответа на ЛС под действие факторов окружающей среды и/или сопутствующей терапии. При этом, генотип остается не затронут.

Sheldon H. Preskorn и его коллеги [44] провели широкомасштабное исследование фенотипической изменчивости, в которое были включены 900 пациентов, проходивших лечение от депрессии. В ходе исследования были выявлены существенные расхождения результатов генетической и фенотипической оценок активности метаболизма. В соответствии с полученными данными, 23 % пациентов, отнесенных по результатам генотипирования к «не медленным» метаболизаторам претерпели модификационные изменения до фенотипа «медленного» метаболизатора.

Полученные результаты наглядно демонстрируют ограничения применения методов генотипирования с использованием отобранных генетических полиморфизмов для оценки реальной метаболической активности у пациентов в текущий момент времени, что свидетельствует о необходимости поиска информативных, физиологически значимых генетических маркеров. В отсутствие молекулярно-генетических маркеров подобного рода в настоящее время огромную значимость имеют методы функциональной оценки ферментов.

Сходные данные были получены и в нашем исследовании при сравнении данных гено- и фенотипирования активности CYP3A4 у 64 сотрудников ФПС ГПС МЧС России. Так, по результатам теста генотипирования аллеля rs2740574 (392A>G) гена CYP3A4 сотрудники ФПС ГПС МЧС России были классифицированы на генотипы «медленных» метаболизаторов (9,4 %) и «не медленных» (80,6 %), а по результату отношения 6-β-гидроксикортизола/ кортизол в моче уровни активности СYP3A4 классифицированы на фенотипы с низкой активностью фермента 13 %, нормальной и высокой активностью фермента 87 %.

При этом только один человек с установленным на первом этапе исследования медленным метаболизмом по аллелю rs2740574 гена CYP3A4 попал в аналогичную группу по фенотипу (величина отношения 6-β-гидроксикортизола/кортизол в моче), а другие 5 сотрудников в группу с нормальной и высокой активностью (1 человек в группу с высокой активностью и 4 человека с нормальной активностью). Таким образом, модификационная изменчивость до фенотипа «не медленного» метаболизатора наблюдалась у 83 % сотрудников ФПС ГПС МЧС России, обладающих генотипом «медленного» метаболизатора (рис. 10).

Рис. 10. Фенотипическая изменчивость активности CYP3A4.

Если допустить возможность ситуации, при которой на организм отсутствует какое-либо влияние индукторов и ингибиторов, то в таком случае индивидуальная активность изоферментов будет оставаться стабильна на протяжении всей жизни. В современном мире изолироваться от всех факторов, оказывающих влияние на цитохромы, практически невозможно. Активность изоферментов постоянно меняется под действием профессионального и экологического контакта с ксенобиотиками (ароматические амины, биспиридины, фураны, гидразины, нитрозамины, ПАУ, пирролины, фенолы, галогеналканы, соединения тяжелых металлов и др.), лекарственных препаратов (барбитураты, антибиотики т.д.), оральных контрацептивов, различных привычек (прием алкоголя, курение), инфекции, особенности питания.

Полученные результаты показывают, что методы генотипирования на практике значительно недооценивают активность метаболизма у человека. Они подчёркивают важное ограничение генотипирования: генотипирование устанавливает генетический потенциал метаболизма индивида, но не обязательно его функциональные возможности в любой момент времени.

Исходя из вышеизложенного, очевидна востребованность методов, дающих точную индивидуальную характеристику ферментативной активности изоферментов цитохрома для оценки детоксикационного потенциала в текущий момент времени. Таковыми, несомненно, являются методы, основанные на определении соотношений концентрации субстратов и их метаболитов. Особенно удобны методы, основанные на определении соотношений эндогенных метаболитов и субстратов, так как не требуют введения в организм экзогенных веществ. Исследования активности изоферментов цитохрома актуальны, например, при профессиональном отборе лиц, деятельность которых связана с рисками воздействия токсических веществ, а также для выбора эффективной и безопасной дозы лекарственного препарата персонально для пациента. Такую оценку позволяют дать методы фенотипирования, которые основаны на определении концентрации субстратов и их метаболитов.

ВЫВОДЫ

1. По результатам тестов генотипирования аллеля rs2740574 (392A>G) гена CYP3A4 обследованные сотрудники ФПС ГПС МЧС России классифицированы на генотипы «медленных» метаболизаторов (9,4 %) и «не медленных» (80,6 %). По результатам тестов генотипирования аллеля rs4987161(566Т>C) гена CYP3A4 все сотрудники ФПС ГПС МЧС России МЧС России отнесены к «не медленным» метаболизаторам.
2. Разработан неинвазивный валидированный хромато-масс- спектрометрический метод определения активности изофермента CYP3A4 по концентрации 6-β-гидроксикортизола и кортизола в утренней моче.
3. В зависимости от величины отношения 6-β-гидроксикортизола/кортизол в моче стало возможным разделить уровни активности СYP3A4 у сотрудников ФПС ГПС МЧС России на три типа:
   • нормальная активность - у 67 %;
   • низкая активность - у 13 %;
   • высокая активность - у 20 %.
4. Статистически значимых различий величины коэффициента соотношения 6-β-гидроксикортизола/кортизол в моче у сотрудников ФПС ГПС МЧС России в зависимости от возраста, стажа работы и вида деятельности не выявлено. Наблюдается тенденция увеличения в 1,8 раза коэффициента соотношения 6-β-гидроксикортизола/кортизол в моче пожарных групп сравнения (менее 5 лет и более 9 лет).
5. Статистически значимых различий величины коэффициента соотношения 6-β-гидроксикортизола/кортизол в моче у 34 пожарных и 30 спасателей ФПС ГПС МЧС России в зависимости от возраста и стажа работы не выявлено.
6. Установлено, что модификационная изменчивость СYP3A4 до фенотипа «не медленного» метаболизатора наблюдалась у 83 % сотрудников ФПС ГПС МЧС России, обладающих генотипом «медленного» метаболизатора.
7. При сравнении данных генотипирования исследованных полиморфизмов и фенотипирования активности CYP3A4 у 64 сотрудников ФПС ГПС МЧС России, связь установленных генетических маркеров с активностью метаболизма не выявлена.
8. Методы генотипирования устанавливают генетический потенциал активности цитохрома Р-450 индивида, но не функциональные возможности его активности в любой момент времени, поэтому для определения точной картины ферментной активности цитохрома Р-450 нужно оценивать его текущую активность на основе методов фенотипирования.