Поиск
Озвучить текст Озвучить книгу
Изменить режим чтения
Изменить размер шрифта
Оглавление
Для озвучивания и цитирования книги перейдите в режим постраничного просмотра.

Глава 8. Технология рекомбинантных белков

Рекомбинантный белок (от англ. recombinant protein) — белок, состоя­щий из аминокислотных последовательностей различных природных белков, полученный с помощью технологии рекомбинантных ДНК. Рекомбинантные белки широко используются в медицине как для лечения и профилактики заболеваний, так и в диагностических целях.

Многие белки высших эукариот содержатся в естественных источниках (в частности, в организме человека или животного) в очень незначительных, следовых количествах. Методами генной инженерии можно ввести соответствующие гены, ответственные за синтез таких белков, в клетки микроорганизмов или млекопитающих и получить экспрессию этих генов.

Например, в клетках E. сoli получена экспрессия около 70 различных белков: инсулина, соматостатина, энкефалина, интерферона, гормона рос­та человека (соматотропин), антигена вируса гепатита В, вируса ящура и т.д.

Ряд компаний налаживают производство белков с помощью ре­комбинантных дрожжей. Дрожжи имеют преимущества по сравнению с E. сoli:

  • наличие секреторных систем, благодаря которым можно получать внеклеточные белки;
  • отсутствие токсичных веществ, которые имеются у E. сoli.

В организме человека вырабатывается множество различных соединений, которые участвуют в регуляции метаболических процессов. Важное место среди таких соединений занимают гормоны. Большинство гормонов ранее получали из трупного материала или из органов животных, однако в настоящее время разработаны генно-инженерные методы их получения.

Получение инсулина

Инсулин — гормон белковой природы, вырабатываемый Р-клетками ПЖЖ для поддержания гомеостаза глюкозы в крови. Недостаток инсулина в крови вследствие приобретенных или наследуемых факторов приводит к заболеванию СД. Это системное заболевание, следствием которого является высокое содержание глюкозы в крови, вызывает поражение многих внутренних органов и систем организма, что неизбежно ведет к ухудшению качества жизни, а без лечения — к смерти. СД называют «болезнью цивилизации», так как первые его описания относятся к античным временам. Инсулин относится к жизненно важным лекарственным средствам, которые Всемирная организация здравоохранения рекомендует самостоятельно производить тем странам, население которых превышает 50 млн человек.

Впервые инсулин был выделен в чистом виде и применен для лечения в 1921 г., а уже в 1923 г. начато его массовое производство. В то время единственным доступным для промышленного использования источником инсулина были ПЖЖ крупного рогатого скота и свиней, поступавшие с боен. По мере накопления данных о последствиях инсулинотерапии выяснилось, что у большого количества пациентов по мере применения животного инсулина развивается ряд серьезных осложнений: снижается чувствительность к вводимому инсулину, что приводит к постоянной корректировке вводимой дозы; проявляются различные аллергические реакции; накапливаются антитела к инсулину и т.д. Данные проблемы связывали с развитием иммунной реакции, которая вызвана структурными отличиями инсулина человека от животных инсулинов. Только в 1955 г. Сенгером была установлена структура инсулина и определена последовательность аминокислот в двух полипептидных цепях А и В (рис. 8.1, см. цв. вклейку).

Инсулин — пептидный гормон, состоящий из двух пептидных ­цепей: А-цепь — из 21 аминокислотного остатка, В-цепь — из 30 аминокислотных остатков. Цепи А и В связаны бисульфидными —S—S-связями, которые обеспечивают пространственную структуру белка ин­сулина. При синтезе инсулина в ПЖЖ вначале образуется пред­шественник инсулина — проинсулин, который состоит из А-цепи, В-цепи и С-пептида, состоящего из 35 аминокислотных остатков. С-пептид отщепляется под действием карбоксипептидазы и трипсина, и проинсулин переходит в активный инсулин.

Инсулин свиньи и быка (крупного рогатого скота) отличается от инсулина человека по аминокислотному составу. Бычий инсулин отличается по аминокислотам в трех положениях, а свиной — в одном положении (положение 30 в цепи В). Именно поэтому неудивительно, что при лечении бычьим инсулином с побочными иммунологическими реакциями приходится сталкиваться гораздо чаще, чем при терапии свиным или человеческим инсулином.

Человеческий инсулин можно производить следующими способами:­

  • полным химическим синтезом;
  • экстракцией из ПЖЖ человека;
  • полусинтетическим;
  • биосинтетическим.

Первые два способа не подходят из-за неэкономичности, недостаточной разработанности первого способа и недостатка сырья (ПЖЖ человека) для массового производства вторым способом.

Препараты инсулина человека, применяемые для лечения в настоящее время, получают либо полусинтетическим методом с помощью ­химико-ферментативной замены В-30 — аминокислоты аланина в свином инсулине на треонин, либо биосинтетическим способом по генно-инженерной технологии. Оба метода позволяют получить человеческий инсулин высокой степени очистки. Это доказано многочисленными дорогими и высокочувствительными аналитическими методами.

Полусинтетический метод имеет то преимущество, что для получения исходного вещества, то есть свиного инсулина, можно прибегнуть к давно и хорошо известным, усовершенствованным способам изготовления и очистки. Теоретически к «загрязнению» конечного продукта ведет лишь попадание в него остатков ферментов или побочных продуктов полусинтеза, возникающих в процессе энзиматической замены одной аминокислоты. Однако появлению таких вторичных примесей в препарате инсулина можно воспрепятствовать путем соответствующего контроля качества. Недостаток полусинтетического метода заключается в постоянной зависимости производства от исходного сырья — свиного инсулина.

Для биосинтетического производства человеческого инсулина были предложены различные способы. Необходимый генный материал переносят в клетки микроорганизма, которые начинают синтезировать предшественников инсулина. Чаще всего применяют один из двух следующих способов:

Для продолжения работы требуется Регистрация
На предыдущую страницу

Предыдущая страница

Следующая страница

На следующую страницу
Глава 8. Технология рекомбинантных белков
На предыдущую главу Предыдущая глава
оглавление
Следующая глава На следующую главу

Оглавление

Данный блок поддерживает скрол*