Поиск
Озвучить текст Озвучить книгу
Изменить режим чтения
Изменить размер шрифта
Оглавление
Для озвучивания и цитирования книги перейдите в режим постраничного просмотра.

Глава 4. Молекулярные механизмы внутриклеточной регуляции

В биотехнологическом производстве лекарственных средств основной целью является получение максимального количества целевого продукта. Однако биообъект (микробная, растительная, животная клетка) в соответствии со своей целевой задачей поддерживает собственный гомеостаз, совершая определенный цикл развития, ориентируясь и воздействуя на который можно оптимизировать процесс по­лучения новых средств. Наиболее значимыми в производственном отношении молекулярными механизмами внутриклеточной регуляции являются индукция и репрессия синтеза ферментов, ретроингибирование, строгий аминокислотный контроль метаболизма, регуляция усвоения азотсодержащих соединений, катаболитная репрессия, «суицидный» эффект и др.

Индукция и репрессия синтеза ферментов

Микробная клетка, являясь продуцентом лекарственных веществ, содержит тысячи ферментов, регулируя активность которых можно изменить и процесс синтеза целевого продукта.

В микробной клетке выделяют две основные группы ферментов: конститутивные и индуцибельные. Конститутивные ферменты присутствуют в клетке на протяжении всего цикла жизнедеятельности в строго определенной концентрации. Индуцибельные (адаптивные) ферменты обеспечивают приспособление организмов к меняющимся условиям внешней среды. Например, индуцибельные ферменты образуются в клетке в случае появления в среде противомикробных веществ, которые подвергаются инактивации под действием образовавшихся ферментов.

Регулируя концентрацию ферментов, можно оказывать влияние на интенсивность биотехнологического процесса. В основе данного процесса лежит концепция регуляции индукции и репрессии синтеза ферментов, предложенная еще в 1960-х годах Ф. Жакобом и Ж. Моно на примере «модели оперона», включающей несколько компонентов:

  • структурный ген, кодирующий структуру белка (иногда последовательно расположены несколько структурных генов, кодирующих ферменты одной метаболической цепи);
  • оператор, который предшествует работе структурных генов и конт­ролирует ее, являясь участком для связывания с белком-репрессором;
  • ген-регулятор, который расположен вне оперона и может находиться даже в другой хромосоме;
  • промотор, с которым связывается РНК-полимераза для инициации процесса транскрипции и образования иРНК, служащей в рибосоме матрицей для конкретного белка.

Принципиально важно, что оператор располагается между участком, именуемым промотором, и структурным геном (рис. 4.1).

Рис. 4.1. Схемы индукции (а) и репрессии (б) фермента: РНК — рибонуклеиновая кислота

Белок-репрессор, находясь на операторе, тормозит движение РНК-полимеразы, и структурный ген не считывается. Когда репрессор удаляется с оператора, репрессия сменяется индукцией, РНК-полимераза перемещается по структурному гену. Для удаления репрессора применяют метод его инактивации индуктором.

Применение механизмов индукции и репрессии образования ферментов в производственной биотехнологии позволяет поддерживать оптимальный уровень активности необходимых ферментных систем, включенных в биосинтез определенного целевого продукта. Например, в геноме рекомбинантного микроорганизма E. сoli создается оперон с общим промотором и оператором для гена индуцибельной â-галактозидазы и гена человеческого инсулина. E. сoli культивируют на среде, обогащенной лактозой, утилизация которой зависит от синтеза â-галактозидазы. В итоге опосредованно инициируется синтез цепей инсулина.

Ретроингибирование и преодоление этого явления

Как правило, перечень и внутриклеточное соотношение первичных и вторичных метаболитов в клетке строго сбалансированы. При изменении условий культивирования клетки данные параметры меняются в соответствии с интересами клетки, что не всегда совпадает с интересами биотехнолога, который стремится к максимальной наработке определенного вещества. Так, например, при наработке значительной концентрации целевого продукта включается механизм внутриклеточной регуляции — ретроингибирование, защищающее клетку продуцента от переизбытка метаболитов в результате подавления конечным продуктом активности первого фермента метаболической цепи.

Явление ретроингибирования заключается в следующем: концентрация конечного метаболита постепенно достигает максимума и становится достаточной для удовлетворения нужд клетки, образовавшийся метаболит начинает блокировать собственный биосинтез по принципу отрицательной обратной связи, подавляя активность первого фермента всей цепи метаболизма. В основе процесса лежит обратимое взаимодействие конечного продукта с аллостерическим центром фермента за счет образования водородных связей. Далее по мере расходования концентрация метаболита в клетке понижается, и как только она достигает нижнего предела, синтез его запускается вновь.

Биотехнолог имеет возможность «заставить» клетку постоянно синтезировать метаболит, либо непрерывно удаляя образующийся метаболит из питательной среды (путем внесения в среду сорбента), либо используя генно-инженерные продуценты с мутацией в аллостерическом центре начального фермента метаболической цепи.

Ярким примером является процесс биосинтеза пенициллина продуцентом Penicillium chrysogenum с применением комплексной среды, обогащенной лизином; при этом лизин — первичный метаболит, пенициллин — вторичный. Аминоадипиновая кислота, являясь одним из предшественников лизина, входит и в состав LLD-трипептида, из которого в последующем формируется молекула пенициллина. Высокое содержание лизина приводит к подавлению не только собственного биосинтеза по механизму ретроингибирования, но и биосинтеза аминоадипиновой кислоты, а следовательно, и пенициллина.

Строгий аминокислотный контроль метаболизма микроорганизмов и его значение при получении лекарственных средств

Ряд лекарственных препаратов по химической структуре относится к группе производных пуринов и пиримидинов — азотистых оснований нуклеиновых кислот. При производстве лекарственных препаратов указанных групп биотехнологу приходится учитывать явление строгого аминокислотного контроля метаболизма клетки.

Строгий аминокислотный контроль метаболизма клетки позволяет ей адаптироваться к меняющимся условиям, не только выживая, но и интенсивно накапливая биомассу. Строгий аминокислотный кон­троль осуществляется с участием рибосомы как «сенсорной» органеллы и биорегулятора гуанозинтетрафосфата, который играет регулирую­щую роль в переключении метаболизма клетки при переносе с бедной питательной среды на богатую и наоборот.

Для продолжения работы требуется Регистрация
На предыдущую страницу

Предыдущая страница

Следующая страница

На следующую страницу
Глава 4. Молекулярные механизмы внутриклеточной регуляции
На предыдущую главу Предыдущая глава
оглавление
Следующая глава На следующую главу

Оглавление

Данный блок поддерживает скрол*