Cовременная диагностика НХЛ обязательно включает иммуногистохимическое исследование опухолевой ткани, поскольку программы терапии в большинстве своем дифференцированы и основываются на нозологической принадлежности лимфомы.
При Т-ЛБЛ дифференциально-диагностическими являются маркеры CD1a, CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, вариабельная экспрессия которых отмечается в подавляющем большинстве случаев. Подтверждает лимфобластную природу опухоли с костномозговым уровнем дифференцировки экспрессия TdT, CD10, LMO2 и CD34. Экспрессия миелоидно-ассоциированных антигенов CD13 и CD33 не противоречит диагнозу ЛБЛ и встречается в 19–32% случаев Т-ЛБЛ [19, 20]. В 20% определяется клональная реаранжировка генов цепей Т-клеточного рецептора [21, 22].
В сочетании с бластной структурой при морфологическом исследовании, опухолевые клетки при ЛБ несут зрелоклеточный В-клеточный иммунофенотип: CD19, CD20, CD22, CD10, sIgM, CD79a, BCL6, CD43, при отсутствии Т-клеточных антигенов и маркеров клеток-предшественниц (TdT, CD34). Пролиферативная активность, анализируемая по маркеру Ki-67, очень высокая, и фракция пролиферирующих клеток достигает 100% [23].
Иммунофенотипический портрет ДВКЛ характеризуется следующими маркерами: СD19, CD20, CD22, CD79a, sIgM, тогда как маркеры клеток-предшественниц не определяются; редко выявляется CD5. При анапластическом варианте ДВКЛ опухолевые клетки экспрессируют CD30. Пролиферативная активность, анализируемая по маркеру Ki-67, составляет 40–90%. На основании иммуногистохимического профиля ДВКЛ представлена двумя вариантами неопухолевых аналогов – фолликулярного и не-фолликулярного (пост-фолликулярного) происхождения В-клеток герминативного центра (GCB) и non-GCB. С. Hans и соавт. в 2004 г. предложили иммуногистохимический алгоритм, согласно которому для GCB-типа характерна экспрессия CD10 и/или BCL6. Таким образом, CD10-негативные варианты ДВКЛ при обнаружении BCL6 и отсутствии MUM1 являются GCB-типом ДВКЛ [24]. Non-GCB вариант ДВКЛ характеризуется следующим иммунофенотипом: CD10–, BCL6–, MUM.1/FOXP1+ или CD10–, BCL6+, MUM1/FOXP1+. Выделение данных иммуногистохимических вариантов важно не только с диагностической, но и с прогностической точки зрения, поскольку результаты терапии достоверно выше при GCB-варианте ДВКЛ. Примерно 30% случаев ДВКЛ при иммуногистохимическом исследовании могут быть отнесены к double-expressor, с коэкспрессией белков c-Myc и BCL-2, пороговыми значениями при иммуногистохимическом исследовании являются соответственно 50 и 40%, причем чаще всего это ДВКЛ non-GCB-типа. Выделение double-expressor при GCB-типе ДВКЛ имеет прогностическое значение [25], особенно это актуально при ДВКЛ у детей, характеризующихся преимущественно GCB-типом.
Отличительным иммунофенотипическим признаком ПМВКЛ является экспрессия CD20, CD19, CD23 (70–95% случаев), CD30 (слабая–умеренная мембранная/цитоплазматическая реакция — около 80% случаев) CD22, CD79a, PAX5, BOB1, Oct.2, CD45, BCL2 (до 65% случаев), экспрессия BCL6 и MUM.1+/FOXP1+ определяется почти в 95% случаев, PD-L1 — в 50–75% наблюдений. Экспрессия sIgM нехарактерна для ПМВКЛ. Отражением значимости активации NFkB сигнального пути в патогенезе данного вариата лимфомы является возможность иммуногистохимического определения экспрессии белков REL, TRAF1 (до 60% позитивных случаев).
В 1985 г. Н. Stein из гетерогенной группы злокачественных гистиоцитозов выделил АКЛ на основании экспрессии Ki-1 (CD30) [26]. В 1988 г. АКЛ была включена в Кильскую классификацию лимфом [27]. При дальнейшем исследовании иммунофенотипа опухоли была установлена вариабельная экспрессия Т-клеточных антигенов. Но даже при их отсутствии Т-клеточная природа АКЛ подтверждается при определении клональной реаранжировки генов цепей Т-клеточного рецептора, экспрессией цитолитических молекул TIA-1 и перфорина.
В настоящее время АКЛ рассматривается как гетерогенная группа заболеваний. Было установлено происхождение опухолевых Т-клеток из CD4+ клеток, γ/δ Т-клеток и даже из CD56+ или CD57+ клеток. В случаях, если клетки опухоли несут на своей поверхности CD56, заболевание сопровождается поражением лимфатических узлов, кожи и течет крайне агрессивно со множественными рецидивами после непродолжительных ремиссий [28].
В зависимости от наличия или отсутствия киназы анапластической лимфомы (ALK) в классификации опухолей кроветворной и лимфоидной тканей ВОЗ (2017) выделены два варианта АКЛ: ALK-позитивная и ALK-негативная. В свою очередь, АКЛ ALK-негативная подразделяется: c реаранжировкой DUSP22 (локус 6p25) с благоприятным прогнозом; с реаранжировкой TP63 с неблагоприятным прогнозом и трипл-негативная. Данное разделение обусловлено не только молекулярно-генетическими, но и клиническими особенностями опухоли. В детском возрасте преобладает ALK-позитивный вариант АКЛ (более 90% всех случаев АКЛ) [29], являющийся прогностически более благоприятным по сравнению с ALK-негативным вариантом [30]. При ALK+ варианте обычно не отмечается BCL2, но белок BAX присутствует в большом количестве. Положительная реакция на ALK не является строго специфичной для АКЛ. Так, В-крупноклеточная с плазмобластной морфологией лимфома может быть ALK+, но в этом случае опухолевые клетки негативны по CD20 и CD30; некоторые варианты нейробластом и воспалительная миофибробластическая опухоль экспрессируют ALK+; в классификации ВОЗ 2022 г. в отдельную нозологию выделен ALK+ гистиоцитоз.
Помимо ALK, на опухолевых клетках определяются CD30, CD45, активационные маркеры CD25, CD38; редко обнаруживаются CD2, CD3, CD4, CD43 [31] и миелоидные маркеры CD13 и CD33. В исследовании Е. Raetz и соавт. была обнаружена экспрессия с-Myc при ALK-позитивном варианте АКЛ у детей [32].