13.1. Методы микробиологической диагностики микозов
Микроскопический метод основан на выявлении возбудителя в неокрашенных и окрашенных препаратах исследуемого клинического материала. Исследуют соскобы с кожи, ногтей, отделяемое покровных тканей, пунктаты абсцессов, отделяемое пазух носа, биологические жидкости (мокроту, бронхоальвеолярную жидкость, мочу, спинномозговую жидкость, желчь) и др. Рассмотрению элементов гриба в препаратах мешают различные компоненты ткани, поэтому на исследуемый материал (соскобы с кожи), помещенный на предметное стекло, наносят 1-3 капли 10-20% раствора NaOH или KOH и через 15 мин слегка придавливают покровным стеклом. Щелочь разрушает ткань («просветляет» ее), способствуя выявлению элементов гриба. Для ускорения этого процесса препарат нагревают на пламени до появления паров. Пораженные волосы и соскобы с ногтей обрабатывают аналогичным способом 20-30% щелочью в течение 1-3 ч.
Микроскопию окрашенных препаратов применяют при исследовании соскобов грануляций, отделяемого язв и свищей, реже - при изучении соскобов с кожи и ногтей для выявления элементов гриба. Препараты окрашивают по Граму, Граму-Вейгерту, Романовскому-Гимзе, Гомори-Грокотту, Ван-Гизону, Райту, Цилю-Нильсену, реактивом Шиффа, акридиновым оранжевым.
Гистопатологические препараты чаще применяют при изучении глубоких микозов в лабораториях с особым режимом работы - с опасными патогенами. Полученный биоптат заливают 10% раствором формалина на 24-48 ч, после чего заключают в парафин или замораживают с последующим получением срезов. Срезы окрашивают гематоксилин-эозином, по Гомори-Грокотту, применяют также ШИК (PAS)-окраску.
Культивирование (посев на питательную среду) выполняют для выделения чистой культуры при комнатной температуре. Диморфные грибы при комнатной температуре образуют мицелий, а при 37 °C (при температуре тела человека) - дрожжеподобные клетки. Для культивирования грибов рода Candida и дерматофитов применяют среду Сабуро, а для гифальных (плесневых) - среду Чапека. Часто в среды добавляют антибактериальные препараты. Культуры возбудителей глубоких микозов из-за их высокой контагиозности получают только в специализированных клинико-лабораторных центрах.
Серологический метод. В сыворотке крови больных обнаруживают АТ с помощью РП, ИФА и др. Перспективно также при этом определение АГ грибов.
Молекулярные методы. Наиболее распространенными являются ПЦР и газожидкостная хроматография.