12.1. Методы микробиологической диагностики протозойных инфекций
Простейших выявляют в различных биологических материалах, взятых от больного.
Фекалии исследуют в день дефекации (обычно доставляют в лабораторию утром), причем вегетативные подвижные формы дизентерийной амебы выявляют не позднее 20 мин после дефекации, а вегетативные формы других простейших (лямблий, диэнтамеб) исследуют в течение первых 1-1,5 ч после дефекации.
Кровь доставляют в лабораторию в стерильных пробирках (для серологических исследований) или в виде мазков и препарата «толстая капля» для исследования на малярию.
Микроскопический метод - основной метод диагностики протозойных инфекций. Микроскопируют мазки, окрашенные по Романовскому-Гимзе или Райту. Иногда применяют серологический, аллергологический, биологический и молекулярно-генетический (ПЦР и др.) методы диагностики.
Исследование фекалий. Фекалии исследуют в день дефекации. Из фекалий, внесенных в небольшом количестве (с булавочную головку) в каплю физиологического раствора, готовят мазок в виде негустой эмульсии на предметном стекле и смешивают с каплей 1% раствора Люголя. На приготовленную смесь наносят покровное стекло и микроскопируют с окуляром × 10 и объективом × 40 для выявления амеб и жгутиковых (лямблий и диэнтамеб). Дополнительно изучают трофозоиты дизентерийной амебы при окраске буферным раствором метиленового синего. Ооцисты криптоспоридий выявляют модифицированными методами окраски по Цилю-Нильсену. Они окрашиваются в красный цвет (кислотоустойчивые).
Исследование крови. Для исследования крови готовят тонкий мазок и толстую каплю, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе или Райту. Для приготовления тонкого мазка на край предметного стекла наносят небольшую каплю крови, к которой касаются краем шлифованного стекла, наклоненного под углом 45° к предметному стеклу. Растекшуюся каплю по шлифованному краю быстро и равномерно передвигают к противоположному краю стекла. Мазок должен быть равномерным и тонким по всей поверхности стекла. Дату исследования, фамилию и инициалы или номер истории болезни наносят простым карандашом на высохшем мазке (надпись не смывается после окрашивания).
Основной метод выявления плазмодий малярии - изучение толстой капли на подкладке. Для этого на предметном стекле готовят мазок крови с помощью края шлифованного стекла. Невысохшей (влажной) поверхностью мазка прикасаются к капле крови, которая при покачивании предметного стекла распределяется (растекается) на большую площадь. Оптимальную толщину полученного препарата определяют возможностью рассматривания печатного текста через толстую каплю.
Для фиксации препаратов применяют метиловый спирт (1-2 мин), этиловый спирт (10 мин) или смесь Никифирова (20 мин). Толстую каплю не фиксируют.