3.1. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В ГИСТОЛОГИИ
Методы исследования в гистологии включают приготовление гистологических препаратов и их изучение с помощью световых или электронных микроскопов. Гистологические препараты представляют собой мазки, отпечатки органов, пленочные препараты, тонкие срезы кусочков органов, окрашенные тем или иным красителем (исследуются также нативные - неокрашенные срезы), помещенные на предметное стекло, заключенные в бальзам и покрытые тонким покровным стеклом. Толщина срезов составляет микрометры (мкм) в световой микроскопии и нанометры (нм) и ангстремы в электронной (в 1 мм = 1000 мкм; 1 мкм = 1000 нм; 1 нм = 10 ангстрем).
Для изготовления гистологического препарата необходимо после взятия материала произвести его фиксацию в том или ином фиксаторе (формалине, спирте, а для электронной микроскопии - в глутаровом альдегиде и четырех-окиси осмия). Делается это для предотвращения процессов аутолиза (самопереваривания, распада) и сохранения структуры органа, близкой к прижизненной. Далее следуют этапы обезвоживания кусочка органа в спиртах возрастающей концентрации и в ксилоле и уплотнения тканей, что необходимо для изготовления тонких срезов. Для придания кусочку органа еще большей плотности и гомогенности (однородности), обеспечивающей высококачественную резку, проводят его заливку в органическую среду - парафин, целлоидин (для световой микроскопии) и органические смолы (эпон, аралдит, дуркупан) - для электронно-микроскопического исследования.
Существуют также физические способы фиксации материала, наиболее распространенным из которых является быстрое замораживание кусочка органа в жидком азоте (точка кипения -196 °С). Для резки замороженного материала используют специальные приборы - криостаты, или замораживающие микротомы. Следует помнить, что от техники фиксации и качества фиксатора зависит присутствие в препарате так называемых артефактов (изменения в строении тканей и органов, возникшие в результате манипуляций при изъятии органа, влияния использованных жидкостей, сред для заливки и др.). Например, при применении спиртовой фиксации печени в клетках наблюдается феномен «убегания гликогена», нарушается естественное расположение гранул гликогена в цитоплазме гепатоцита (см. рис. 3.4).