Для изучения функциональной активности лимфоцитов и других клеток крови необходимы эффективные способы их разделения (рис. 2.1). Идеальные методы разделения характеризуются незначительной степенью потерь клеток при высокой степени очистки, сохранением физиологической активности выделенных клеток. В основе методов выделения клеток лежат два главных принципа.
1. Разделение клеток по их физическим свойствам, например по размерам, плотности или заряду.
2. Разделение клеток по поверхностным антигенам.
&hide_Cookie=yes)
Рис. 2.1. Основные методы разделения клеток
Среди разнообразных способов разделения клеток крови наибольшее распространение получили гравитационные, основанные на различной удельной плотности клеток крови, которые различаются между собой следующим образом: эритроциты > нейтрофилы и эозинофилы > лимфоциты и моноциты > тромбоциты.
2.1. ВЫДЕЛЕНИЕ ЛЕЙКОЦИТОВ
Принцип метода. Для осаждения эритроцитов из периферической крови применяют растворы декстрана, желатины и др. Гепаринизированную кровь смешивают с 6% раствором декстрана или 0,3% раствором желатины в соотношении 1:5. Смесь в пробирке отстаивают 30-40 мин под углом 45° в термостате при температуре 37 °С до осаждения эритроцитов. Плазму, обогащенную лейкоцитами, отбирают, примесь эритроцитов лизируют. Выделенные клетки отмывают центрифугированием в растворе Хенкса или культуральной среде 199 при 1000 об/мин в течение 5 мин.
2.2. ВЫДЕЛЕНИЕ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК
Мононуклеарные клетки выделяют (рис. 2.2, см. также цв. вклейку) из периферической крови человека по методу Boyum (1968), основанному на седиментации в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-урографина. Фиколл в данной смеси выступает как агент, агрегирующий эритроциты, а изопак (или урографин) нужен для создания изотоничности и плотности 1,077 г/см3.