11.Определение чувствительности бактерий к дезинфицирующим средствам в растворе

Приготовление бактериальной взвеси.

1. Культуры микроорганизмов, выращенные на плотной питательной сре- де в течение 18 – 24 часов, смыть стерильным изотоническим раство- ром хлорида натрия.
2. Бактериальную суспензию каждого микроорганизма довести мутности, соответствующей концентрации 5 х 10⁸ клеток/мл, что соответствует 5 единицам по стандарту мутности для оптической стандартизации бак- терий (ГИСК им. Тарасевича Л.А.) или 1,5 единицам Мак-Фарланда (измерение денситометром согласно данным фирмы-изготовителя стандартов Мак-Фарланда bioMerieux) или теоретической оптической плотности 0,375 (концентрация BaSO₄ 7,2 х 10^-5 моль/л) (измерение денситометром при 550 нм).

Проведение исследования

1. Растворы дезинфектантов в рабочей концентрации (0,9 мл) разлить в стерильные пробирки с резиновыми пробками.
2. В пробирки с растворами дезинфектантов внести по 0,1 мл микробной взвеси и перемешать встряхиванием несколько секунд.
3. Экспозиция в течение времени, указанного в методических рекоменда- циях по применению ДС для данной концентрации при требуемом ре- жиме обработки.
4. После действия дезинфектанта в указанной в методических рекоменда- циях по использованию препарата (или необходимой для эксперимен- та) экспозиции, внести по 0,5 мл раствора нейтрализатора и перемешать встряхиванием
5. Посеять на плотную питательную среду по 0,1 мл смеси и поместить чашки с посевами в термостат
6. Параллельно с проведением опыта поставить контроли:
7. Контроль жизнеспособности микроорганизма (посев микробной куль- туры на питательную среду);
8. Контроль стерильности раствора дезинфектанта без добавления куль- туры (посев приготовленного раствора дезинфектанта на питательную среду);
9. Контроль полноты нейтрализации дезинфектанта (1 - к раствору ДС добавляется нейтрализатор, 2 – в полученную смесь вносится микроб- ная суспензия, 3 – выдерживается необходимая экспозиция, 4 – высев смеси на питательную среду);
10. При наличии устойчивости – контроль чувствительности тест-штаммов микроорганизмов к тестируемым ДС в бактерицидном режиме.

Учет результатов

По истечении времени, необходимого для культивирования микроорганизмов данного вида, провести учет результатов по количеству выросших на чашке Петри колоний. При отсутствии роста увеличивают сроки культивирования микроорганизмов в 2 раза (так, при сроках культивирования 24 ч., оставляют в термостате до 2-х суток).

Выросшие колонии подвергают микроскопии.