Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование проводят с целью определения молекулярно-генетического подтипа рака молочной железы и уточнения тактики медикаментозного лечения (табл. 1). При метастатической опухоли для назначения лечения необходимо исследовать ИГХ-статус метастазов.
При необходимости и для дифференциального диагноза и определения гистогенеза опухоли молочной железы целесообразно проводить иммуногистохимическое исследование с использованием 4-5 маркеров в зависимости от рекомендаций ВОЗ на данное время.
Таблица 1
Молекулярно-генетические подтипы рака молочной железы
| Биологический подтип (ио оценке мультигеиной жепрее | III Х-харакзеристики |
| Люминальный А | F.R— позитивный HER2/neu— негативный Ki-67 — низкий (■' 20%) (Clieang М. С. et а!.. 2009) PgR — высокий (> 20"о) (Prat A. et а!.. 2013) |
Люминальный В Люминальный В HER2-neraгивный
ER— позитивный
111 К2 пен — негативный
Ki-67 — высокий (> 20%)
PgR— низкий (<20%)
Люминальный В НЕР2-позитивный
ER — позитивный
HER2 пен — гиперэкспрессия пли амплификация
Ki-67 — любой
PgR — любой
| HER2-I юзи гивный | ER — нега гивный |
| | HER2/neu— гиперэкспрессия или амплификация |
| | Ki-67 — любой |
| | PgR — негативный |
| Биологический подтип (по оценке мультигеиной экспрессии) | ИГХ-характеристики |
| Тройной негативный | Тройной негативный небазальный ER — негативный HER2/neu — негативный Ki-67 — любой PgR — негативный СК 5/6 — негативный |
| Тройной негативный базальный ER — негативный HER2/neu — негативный Ki-67 — любой PgR — негативный СК 5/6 — позитивный |
Исследование проводится на биопсийном и операционном материале. Количество фрагментов биопсии должно соответствовать размеру опухоли в связи с наличием гетерогенности рака молочной железы.
В диагнозе необходимо отображать наиболее агрессивный подтип вне зависимости от того, какую долю он составляет от общего объема опухоли.
В связи со значительным влиянием условий преаналитического этапа на результаты ИГХ-исследования требуется постоянный контроль за их соблюдением. Современные стандарты диагностики требуют использовать только 10% нейтральный забуференный формалин. Объем фиксатора должен превышать объем образца не менее чем в 10 раз. Время фиксации для биопсийного образца — от 6 до 8 часов (допустимо до 12 часов), для операционного — от 18 до 72 часов. Декальцинацию необходимо проводить с помощью щадящих методов без использования сильных кислот в связи с разрушением антигенных детерминант в кислой среде.
Необходимыми маркерами для исследования рака молочной железы являются HER.2, ER, PgR, Ki-67. Для подтверждения базального подтипа целесообразно расширить панель с применением маркеров — 4-5 маркеров, рекомендованных для исследования ВОЗ на дату исследования.
Ложнонегативные и ложнопозитивные результаты могут возникнуть:
- при длительной холодовой ишемии в результате деградации антигенов;
- при длительной фиксации в формалине, более 48 часов;
- при использовании других фиксирующих жидкостей, кроме нейтрального забуференного формалина, а также при уровне pH формалина меньше 7,0 и более 7,4;
- в результате декальцинации с использованием кислотосодержащих растворов;
- при использовании не валидированных реагентов и т. д.
При получении в результате исследований негативной экспрессии для исключения ложнонегативной реакции или при подозрении на ложнопозитивную реакцию исследуемого маркера целесообразно повторить исследование с того же блока. В случае двойной негативной реакции целесообразно повторить исследование с другого блока.