Для лабораторной диагностики врожденного сифилиса применяются прямые и непрямые методы. Прямые методы диагностики выявляют самого возбудителя или его генетический материал. К непрямым методам диагностики сифилиса относятся тесты, выявляющие антитела к возбудителю сифилиса в сыворотке крови и цереброспинальной жидкости.
Абсолютным доказательством наличия заболевания является обнаружение бледной трепонемы в образцах, полученных из очагов поражений, с помощью микроскопии в темном поле зрения, прямой иммунофлюоресценции, иммуногистохимического исследования с использованием моноклональных или поликлональных антител, а также выявление специфической ДНК и РНК возбудителя методом полимеразной цепной реакции с использованием тест-систем, разрешенных к медицинскому применению в Российской Федерации. Прямые методы используются для диагностики ранних форм заболевания (первичный и вторичный сифилис) с клиническими появлениями (эрозивно-язвенные элементы), для подтверждения врожденного сифилиса (ткань пуповины, плаценты, органы плода, отделяемое слизистой оболочки носа, содержимое пузырей, отделяемое с поверхности папул).
Серологические методы диагностики, рекомендуемые для исследования сыворотки крови.
Нетрепонемные тесты:
- реакция микропреципитации (РМП) с плазмой и инактивированной сывороткой или ее аналоги:
- RPR (РПР) - тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins), или экспресс-тест на реагины плазмы
- VDRL - Venereal Disease Research Laboratory test- тест Исследовательской лаборатории венерических заболеваний
- TRUST - тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой (ToluidinRedUnheatedSerumTest)
- USR - тест на реагины с непрогретой сывороткой (Unheated Serum Reagins)
Общая характеристика нетрепонемных тестов:
- применяется антиген нетрепонемного происхождения - стандартизованный кардиолипиновый антиген;
- ранняя позитивация;
- возможность определения титров антител
- они имеют невысокую чувствительность (до 70-90% при ранних формах сифилиса и до 30% - при поздних), могут давать ложноположительные результаты (3% и более).
Преимущества нетрепонемных тестов:
- низкая стоимость;
- техническая простота выполнения;
- быстрота получения результатов.
Показания к применению нетрепонемных тестов:
- проведение скрининга населения на сифилис;
- определение активности течения инфекции (определение титров антител);
- контроль эффективности терапии (определение титров антител).
Трепонемные тесты:
- ИФА (иммуноферментный анализ) - высокочувствительный и специфичный тест. Чувствительность при врожденном сифилисе - 98-100%, специфичность - 96100%. Дает возможность дифференцированного и суммарного определения IgM и IgG антител к возбудителю сифилиса;
- иммуноблоттинг является модификацией ИФА. Чувствительность и специфичность - 98-100%. Может применяться для подтверждения диагноза, в особенности при сомнительных или противоречивых результатах других трепонемных тестов.
Относительно новыми для использования в Российской Федерации являются методы выявления трепонемоспецифических антител, основанные на методах иммунохемилюминесценции (ИХЛ) и иммунохроматографии (ИХГ).
- метод ИХЛ, (иммунохемилюминесценции) обладающий высокой чувствительностью и специфичностью (98-100%), дает возможность количественного определения уровня антител к возбудителю сифилиса, может быть использован для подтверждения сифилитической инфекции и скрининга. Ограничения применения: не может быть использован для контроля эффективности терапии, может давать ложноположительный результат.
- ПБТ (простые быстрые тесты у постели больного, или иммунохроматографические тесты) позволяют проводить быстрое определение содержания трепонемоспецифических антител к возбудителю сифилиса в образцах сыворотки и цельной крови без использования специального лабораторного оборудования и применяться при оказании первичной медико-санитарной помощи, в том числе по эпидемиологическим показаниям. Ограничения применения: не могут быть использованы для контроля эффективности терапии, могут давать ложноположительный результат.
- РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) - высокочувствительный и специфичный тест. Чувствительность при врожденном сифилисе - 76%- 100%, при скрытом - 94-97%, специфичность - 98-100%;
- РИФ (реакция иммунофлуоресценции, в том числе в модификациях РИФабс и РИФ200) - достаточно чувствительна на всех стадиях сифилиса, специфичность -94-100%. РИФ применяется для дифференциации скрытых форм сифилиса и ложноположительных результатов исследований на сифилис;
- РИБТ (РИТ) (реакция иммобилизации бледных трепонем) - классический тест для выявления специфических трепонемных антител; чувствительность (суммарно по стадиям сифилиса) составляет 87,7%; специфичность - 100%. Трудоемкий и сложный для постановки тест, требующий значительных средств для проведения тестирования. Сфера применения РИБТ сужается, однако она сохраняет свои позиции как «реакция-арбитр» при дифференциальной диагностике скрытых форм сифилиса с ложноположительными результатами серологических реакций на сифилис.
Общая характеристика трепонемных тестов:
- применяется антиген трепонемного происхождения;
- чувствительность - 70-100% (в зависимости от вида теста и стадии сифилиса);
- специфичность - 94-100%.
РИФ, ИФА, иммуноблоттинг (ИБ) становятся положительными с 3-й недели от момента заражения и ранее, РПГА и РИБТ — с 7-8-й.
Преимущества трепонемных тестов: высокая чувствительность и специфичность.
Показания к применению трепонемных тестов:
- подтверждение положительных результатов нетрепонемных тестов;
- подтверждение в случае расхождения результатов скринингового трепонемного теста и последующего нетрепонемного теста, а также скринингового и подтверждающего трепонемных тестов;
- проведение методами ИФА, РПГА, ИХЛ, ПБТ скрининга отдельных категорий населения на сифилис (доноры, беременные, больные офтальмологических, психоневрологических, кардиологических стационаров, ВИЧ-инфицированные).