Диагностика синегнойной инфекции основывается на клинической картине, результатах бактериологического, серологического методов и ПЦР-диагностики.
Бактериологический метод идентификации микроорганизмов является наиболее распространенным в клинических лабораториях. Результаты микробиологического исследования при инфекционных осложнениях в значительной степени зависят от вида патологического материала, времени и способа его взятия. Эти факторы нередко имеют определяющее значение для правильной трактовки результатов исследования.
Для успешного проведения анализа бактериологическим методом большое значение имеет способ взятия исследуемого материала. При взятии материала для исследования следует соблюдать и учитывать следующие важные моменты:
при заборе и работе с клиническим материалом персонал лаборатории должен использовать соответствующую спецодежду.
при направлении материала на исследование необходимо исключить вероятность микробной контаминации наружной поверхности транспортного контейнера и сопровождающих образец документов;
контейнеры для транспортировки материала должны обеспечивать герметичность, стерильность, целостность образцов, а также - исключать при открытии образование аэрозоля. Исследуемый материал следует забирать по возможности до начала антибактериальной терапии;
наиболее правильный способ взятия жидких материалов - объемный с помощью стерильного шприца. Отбор материала тампоном производят только при невозможности осуществления объемного метода.
количество клинического материала определяется выбором методов исследования и разумной достаточностью, поскольку недостаточное количество материала может определять ложноотрицательный результат;
в направлении на микробиологическое исследование необходимо указывать фамилию, имя, отчество, год рождения пациента, номер истории болезни, дату и время забора материала, клинический диагноз, температуру.
сроки доставки клинического материала должны быть сокращены до минимума.
Нарушение правил взятия биологического материала чревато нежелательными последствиями экономического (излишняя трата расходных материалов) и медицинского характера (повторное взятие биологического материала у пациента, задержка результатов лабораторного исследования, возможность медицинских ошибок).
При поражении наружных покровов диагностика не представляет особого туда. На наличие синегнойной инфекции может указать голубовато-зеленое окрашивание краев и отделяемого ран, перевязочного материала, особенно после обработки Н2О2. Бактериологическое исследование в этом случае в основном лишь подтверждает наличие Pseudomonas aeruginosa, нередко в ассоциации с другими возбудителями внутрибольничных инфекций.
В общем, схема идентификации Pseudomonas aeruginosa включает посев исследуемого материала на специальные питательные среды с ингибитором или в среды накопления с последующим высевом из них на селективные плотные питательные среды.
При целенаправленном исследовании на псевдомонады, в случае госпитальной вспышки инфекции, посев проводят на селективную среду ЦПХ- агар бактериологической петлей или ватным тамоном. Если исследование не является целенаправленым в отношении выявления псевдомонад, то посев производят на любую из общепринятых питательных сред: 1,5% питательный агар, 5% кровяной агар, агар Эндо. Посевы инкубирую в термостате при температуре 37о. Засеянные чашки после инкубации просматривают и отмечают колонии, подлежащие дальнейшему исследованию. Идентификацию выделенной культуры проводят по ряду тестов:
при микроскопии мазков обнаруживают грамотрицательные неспорообразующие палочки;
наличие зеленого пигмениа - пиоцианина, характерного только для
Pseudomonas aeruginosa.
от культуры исходит запах жасмина;
Таким образом, на 2-е сутки можно идентифицировать около 75% культур по морфологии колоний, запаху и образованию сине-зеленого пигмента, а остальную часть довести до вида с помощью дополнительных тестов, и получить окончательный результат на 3-4 сутки. Чистую культуру микроорганизмов
тестируют на чувствительность к антибиотикамм. Проведение исследований по оценке антибиотикочувствительности необходимо для решения трех основных задач:
- обоснование назначения оптимальной индивидуальной антибиотикотерапии конкретному больному; обоснование эмпирической антибиотикотерапии на основании данных эпидемиологического мониторинга за уровнем резистентных мироорганизмов циркулирующих в лечебном учреждении; оценки риска распространения госпитальных штаммов. Исследование антибиотикочувствительности предполагает последовательное осуществление следующих этапов:
оценка целесообразности изучения чувствительности к антибактериальным препаратам выделенного микроорганизма;
выбор антибактериальных препаратов подлежащих включению в исследование;
выбор методов проведения исследования и контроля качества;
интерпретация результатов исследования и выдача рекомендаций по лечению.
Микрорганизмы Pseudomonas aeruginosa в связи с высокой частотой распространения приобретенной устойчивости подлежат обязательному исследованию на антибиотикочувтвительность (табл.3).
Дополнительные препараты по уровню природной активности, как правило, уступают антибиотикам первого ряда, однако во многих случаях, прежде всего по экономическим соображениям, могут быть использованы в терапии.
Существует несколько современных стандартизированных методов для оценки чувствительности: методы серийных разведений и диффузионные
Методы серийных разведенй основаны на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность
антибиотика величины минимальной подавляющей концентрации (МПК). Для определения величины МПК заданные концентрации антибиотика вносят в питательную среду, которую затем засевают культурой исследуемого микроорганизма, после инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста.