Общая и частная вирусология

Вирусы — мельчайшие неклеточные биологические объекты, отличительными признаками которых являются обязательный паразитизм на генетическом аппарате живых клеток (растений, бактерий, насекомых, животных) и наличие в геноме нуклеиновой кислоты только одного типа. Вирусами поражены все формы жизни от растений и бактерий до человека. Способность вирусов вносить новую информацию в генетический аппарат клетки-хозяина определяет их роль как важнейшего фактора изменчивости и биологической эволюции всего живого. Наконец, с вирусами связывают возникновение опухолей, атеросклероза, диабета, разнообразных нервно-психических заболеваний и другой инфекционной патологии.

Несмотря на то что вирусы относятся к представителям живого,
их нельзя назвать организмами. Вирусы имеют ряд принципиальных отличий от других живых систем:

• малые размеры;
• очень простое строение вириона — геном, состоящий из ДНК или РНК и капсид (белковая оболочка);
• отсутствие клеточного строения (нет цитоплазмы, клеточных мембран, рибосом);
• наличие у вириона только одного вида нуклеиновых кислот — ДНК или РНК, по этому принципу вирусы разделены на два подцарства;
• отсутствие способности к росту и бинарному делению;
• наличие паразитизма на молекулярном (генетическом) уровне; в клетку проникает только геном вируса и полностью подчиняет ее своим интересам;
• способность к интеграции собственного генома с геномом клетки;
• отсутствие возможности существования без клетки хозяина, так как репродукция возможна только в клетке хозяина.

Цель занятия

Изучение основных закономерностей строения вирусов, способов их выделения и культивирования, общей схемы вирусологических исследований; ознакомление с устройством, режимом работы вирусологической лаборатории и основными вирусологическими методами лабораторной диагностики вирусных инфекций.

Студент должен знать

1. Устройство и режим работы вирусологической лаборатории и условия соблюдения противоэпидемического режима при работе с неинактивированным исследуемым материалом.

2. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций с использованием лабораторных животных и культур клеток.

Студент должен уметь

1. Применять методы лабораторной диагностики вирусных инфекций с использованием куриных эмбрионов.

2. Применять методы лабораторной диагностики вирусных инфекций с использованием чувствительных культур клеток.

Правила работы в вирусологической лаборатории

Вирусологическая лаборатория должна иметь следующие помещения:

• помещение для работы с культурами клеток, куриными эмбрионами, лабораторными животными;
• помещение для серологических исследований;
• термостатную;
• аппаратную;
• моечную;
• стерилизационную;
• виварий для здоровых и зараженных животных;
• гардероб для смены личной одежды на спецодежду;
• санитарный пропускник.

В лаборатории должно быть не менее двух боксов с предбокс-
никами, оснащенных ультрафиолетовыми лампами: в одном боксе проводится работа с культурами клеток, в другом — с вирусами. Должен быть предусмотрен отдельный сток со специальным сборником для дезинфекции сточных вод.

Полы и стены лабораторных помещений покрывают легко моющимся материалом, который должен выдерживать обработку дезинфицирующими растворами (кафель).

Мебель вирусологической лаборатории должна быть простой, иметь большую легко дезинфицируемую рабочую поверхность, покрытую пластиком.

Количество и виды лабораторного оборудования вирусологической лаборатории определяются применяемыми методами и объемом исследований. Однако в современной вирусологической лаборатории необходимо иметь электрические стерилизаторы и сушильные шкафы, термостаты, вакуум-насосы, водяные бани с терморегуляцией, центрифуги, гомогенизаторы, бидистиллятор, магнитные мешалки, аналитические весы, микроскопы разных типов (световые, фазовоконтрастные, люминесцентные), иономеры и др. Длительное хранение вируссодержащего материала, сывороток, антигенов необходимо осуществлять в камерах глубокого замораживания (–30 °С и ниже). Для обеспечения работы по культивированию вирусов в куриных эмбрионах необходимо иметь набор инструментов для их заражения и вскрытия, овоскоп и инкубатор на 37 °С, где содержатся незараженные и после заражения куриные эмбрионы.

Для работы в вирусологической лаборатории необходимы: стеклянная посуда (матрацы, флаконы, колбы, пробирки, пипетки), панели из полистирола, резиновые пробки разных размеров.
В повседневной работе в вирусологической лаборатории широко используют солевые растворы (Эрла, Хенкса) и специальные питательные среды (среда 199, Игла и др.). Необходимо иметь
наборы диагностических препаратов (диагностикумов, специфических иммунных сывороток, флюоресцирующих антител).

Вирусологическая лаборатория должна располагать лабораторными животными (белые мыши, морские свинки, кролики)
и иметь кур как доноров крови.

Режим работы вирусологической лаборатории предусматривает ряд мер, направленных на предупреждение внутрилабораторного заражения персонала, занятого работой с вирусами и вируссодержащим материалом.

Всех сотрудников лаборатории вакцинируют против тех вирусов, с которыми они могут встретиться в данном районе. Персонал лаборатории проходит тщательный инструктаж, и его обес-
печивают спецодеждой. Прием пищи и курение в помещении лаборатории запрещено. При работе с заразным материалом персонал должен строго соблюдать меры предосторожности во избежание заражения. Все сотрудники должны работать в защитной одежде. После окончания работы в помещениях лаборатории включают бактерицидные лампы и проводят влажную дезинфекцию хлорсодержащими растворами или 3% раствором перекиси водорода.