IV. ГЛАВА 5. ХРОМАТОГРАФИЯ

IV.5.1. ОБЩИЕ ПРИЕМЫ ХРОМАТОГРАФИИ НА КОЛОНКЕ

В этом разделе рассматриваются некоторые наиболее важные вопросы, связанные с практическим применением метода хроматографии на колонке - одного из самых распространенных методов практической биохимии.

Колонки и вспомогательное оборудование

Хроматографическая колонка¹⁰⁹ должна быть устроена таким образом, чтобы неподвижная фаза доходила до самого ее дна, т.е. чтобы «мертвое пространство» у основания колонки было минимальным; в противном случае уже разделившиеся фракции будут скапливаться на дне и перемешиваться. Для этого фирменные колонки комплектуются адаптерами (рис. IV.5.1, б, в - 2), которые не только «решают» вопрос перемешивания фракций, но и позволяют варьировать объем колонки (изменять соотношение высота-диаметр). При выходе из колонки элюат через систему капилляров поступает в детектор (рис. IV.5.6) и (или) в коллектор фракций (рис. IV.5.5). Если в ходе разделения необходимо поддерживать постоянную температуру, можно надевать на колонку термостатируемую «рубашку», внутри которой циркулирует жидкость, подаваемая из термостата или холодильника с помощью насоса.

Рис. IV.5.1 (начало). Хроматографические колонки; схематическое изображение «самодельного» (а) и «фирменного» (б) вариантов: 1 - резервуар; 2 - элюирующий раствор; 3 - стеклянная колонка; 4 - сорбент; 5 - стеклянная вата, пластина из пористого стекла и т.п.; 6 - емкость с элюирующим раствором; 7 - адаптер; 8 - синтетическая сетка; 9 - капиллярный шланг, соединяющий колонку с дополнительным оборудованием (коллектор фракций, регистрирующее устройство и т.п.)

¹⁰⁹ Колонку можно сделать из бюретки, просто из стеклянной трубки, даже из 10 мл одноразового шприца (годится только для обессоливания небольших объемов - не больше 1 мл); чтобы сорбент не вытекал из колонки, а фракции не перемешивались в «мертвом пространстве», используют различные приемы (рис. IV.5.1, а-5; б, 7).