13.1. ПРИНЦИПЫ ИНДИКАЦИИ И ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
Как известно, классическое бактериологическое исследование с применением техники анаэробного культивирования и определения чувствительности к антибактериальным препаратам отличается длительностью (до 3 нед, так как некоторые облигатно-анаэробные виды растут медленно) и не всегда дает возможность получить бактерии искомых видов из десневой борозды.
Точно идентифицировать и подсчитать бактерии в сложных смесях, например в материале из полости рта, - непростая задача. Любой из применяемых для этого методов имеет погрешности. Так, многие молекулярные методы предполагают анализ ДНК, выделенной без культивирования микроорганизмов полости рта - непосредственно из пробы. Такой подход исключает потерю данных по некультивируемым видам бактерий (>50% микрофлоры полости рта) и устраняет погрешности культурального метода. Однако при этом все равно возможны ошибки, обусловленные невозможностью обеспечить оптимальные условия для выделения ДНК из микроорганизмов разных групп, присутствующих в смеси.
Большие надежды в этом плане возлагаются на ПЦР, позволяющую выявлять генетические маркеры любых существ, в том числе клинически значимых видов микроорганизмов.
ПЦР - молекулярно-биологический метод диагностики. Он основан на анализе нуклеиновых кислот, поэтому для проведения теста не требуется сохранения жизнеспособности бактерий, в том числе анаэробных, и специальных предосторожностей при транспорте исследуемого материала. Преимуществами этого метода являются высокая чувствительность, специфичность и быстрота (анализ проводится в течение нескольких часов). В России первые молекулярно-генетические исследования состава пародонтопатогенной микрофлоры были выполнены с помощью немецкой системы «MicroDent», а затем и отечественной системы «Мультидент-5».