Глава 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МЕТАБОЛИТОВ

3.1. ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ АНАЛИТИЧЕСКИХ ПРОЦЕДУР В МЕТАБОЛОМИКЕ

Выделение метаболитов из тканей и клеток состоит из ряда стадий. Методики обработки тканей и клеток детально разработаны и широко применяются на практике в клинической диагностике.

Первоначально для разрушения межклеточных связей, клеточной стенки и плазматических мембран применяют механическую (в жидкой или твердой среде) или немеханическую (ферментативную, химическую, физическую) обработку ткани (рис. 3.1).

Для ферментативной обработки (как правило, мышечной ткани, перед гомогенизированием) используют трипсин, коллагеназу, протеинкиназу-К и другие ферменты.

При механической обработке для мягкого растирания ткани ее предварительно измельчают ножницами, затем гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе с тефлоновым пестиком (гомогенизатор Поттера-Эльвегейма).

В результате получают препарат со смесью метаболитов, содержавшихся в исходном образце.

Аликвоты полученного препарата используют для качественного и количественного анализа в целях определения метаболического профиля исследуемого органа. При этом идентифицируют различные метаболиты и определяют их количества. Проводят анализ полученных данных и ставят диагноз.

Современные методы качественного и количественного анализа - ГХ-МС, ЖХ-МС/МС, CE-МС, FT-МС-спектроскопия, ЯМР-спектроскопия и др.

Рис. 3.1. Последовательность аналитических процедур в метаболомике

3.2. МЕТОДЫ АНАЛИЗА (ОБНАРУЖЕНИЯ) И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КОМПОНЕНТОВ ФРАКЦИЙ

3.2.1. Хроматография

Хроматографию открыл и предложил как метод разделения и анализа смесей русский ученый Михаил Семенович Цвет в 1903 г.

Хроматография - аналитический метод, сочетающий в себе и разделение, и количественное определение веществ, входящих в состав многокомпонентных проб.