Иммуногистохимия

КАЧЕСТВО СРЕЗОВ

Следует уделять особое внимание качеству срезов - для иммуноморфологических исследований рекомендуется использовать только качественные срезы (тонкие, плоские, прочно закрепленные на предметном стекле).

Неровные срезы, имеющие плохой контакт с предметным стеклом, окрашиваются неравномерно и имеют значительное фоновое окрашивание (рис. 110).

В качестве стандарта в иммуногистохимии приняты срезы толщиной 4 μм.

Рис. 110. Фокус интенсивного фонового окрашивания, связанного с неудовлетворительным качеством среза. Ангиосаркома кожи. Иммуногистохимическое выявление HMB45, х150

ФИКСАЦИЯ

При хорошем качестве фиксации (качественный фиксирующий раствор, оптимальная температура, рН, время) иммуногистохимия дает лучшие результаты. Стандарт - фиксация в течение 24-48 ч.

Необходимо проверять образцы ткани перед проводкой для определения необходимости дополнительной фиксации.

Неудовлетворительные условия фиксации влияют на результаты иммуногистохимического окрашивания (рис. 111) и могут привести к проблемам в интерпретации результатов.

Рис. 111. Артифициальное неравномерное окрашивание среза вследствие недостаточной фиксации кусочка ткани. Оценка реакции невозможна. Иммуногистохимическое выявление HER2/neu, х100

АДГЕЗИЯ СРЕЗОВ

Нельзя использовать адгезивы на основе белков (клей, крахмал, желатин), поскольку они служат причиной фонового окрашивания препарата (рис. 112). Следует пользоваться предметными стеклами со специальным адгезивным (полилизиновым, силановым или электростатическим) покрытием.

Адгезивы на основе белков могут блокировать заряженную поверхность предметного стекла. Это вызывает неполную адгезию среза и ведет к неравномерному окрашиванию препарата вследствие затекания реагентов под срез.