С целью изучения особенностей репаративных процессов у больных с длительно незаживающими ранами после трансплантации криоконсервированных жизнеспособных аллодермотрансплантатов был проведен ряд морфологических и иммуногистохимических исследований.
Биопсийный материал получали из различных участков раневой поверхности. Исследования проводили до начала лечения, а также на 5, 10, 15-е сутки после трансплантации. Количество биопсийного материала, а также глубина взятия биоптата рассчитывались с учётом необ-
ходимости получения максимально информативного образца, включающего все слои раны и прилежащие ткани.
Для исследования биоптаты доставляли в стерильном, охлажденном (+4 °С) физиологическом растворе через 2-3 ч с момента взятия. Часть полученного материала использовали для изготовления полутонких срезов, которые окрашивали метиленовым синим, азуром II и основным фуксином. Из другой части приготовлялись криостатные срезы. Иммуногистохимические реакции проводили по стандартному стрептавидин-биотин-пероксидазному методу с использованием моно- и поликлональных первичных антител.
В исследовании использовались первичные антитела, характеризующие:
• компоненты ВКМ - интерстициальные коллагены I и III типов, фибронектин (клеточно-ассоциированная и плазменная формы), тенасцин (компонент незрелого ВКМ), мерозин (Ламинин-2);
• БМ: коллаген IV типа, коллаген VII типа, ламинин-1;
• адгезивные молекулы: VLA-2 (α2β1-интегрин) - поверхностный клеточный рецептор к коллагену, VLA-6<m> (α6β1-интегрин) - поверхностный клеточный рецептор к ламинину;
• промежуточные филаменты: CK 10/13 и 5/18 типов, α-ГМА - маркер миофибробластов и гладкомышечных клеток;
• клетки воспалительного инфильтрата: CD4 - T-хелперы, CD8 - T-супрессоры; CD68 - моноциты/макрофаги;