Часть IV. Физиология систем внутренних органов

Для измерения содержания гемоглобина существует много методов, в том числе:

• определение количества связанного О2 (1 г гемоглобина может присоединить до 1,36 мл О2);
• анализ уровня железа в крови (содержание железа в гемоглобине составляет 0,34%);
• колориметрия (сравнение цвета крови с цветом стандартного раствора);
• измерение экстинкции (спектрофотометрия).

Принцип метода состоит в определении содержания Нb в крови по экстинкции монохроматического света.

E = lg(I0/I), (23.19)

где I0 — интенсивность падающего света; I — интенсивность прошедшего света.

Экстинкцию удобно использовать в связи с тем, что она прямо пропорциональна концентрации растворенного вещества С:

E = lg(I0/I) = eCd, (23.20)

где d — толщина слоя раствора; e — коэффициент экстинкции (величина, постоянная для каждого вещества). Линейная зависимость между экстинкцией, концентрацией и толщиной слоя раствора называется законом Ламберта–Бера. Этот закон справедлив только для монохроматического света.

При проведении рутинных определений уровня гемоглобина отдают предпочтение последнему методу, так как при использовании первых двух способов необходима сложная аппаратура, а метод колориметрии неточен.

Красный цвет растворов гемоглобина (и, следовательно, крови) обусловлен тем, что это вещество относительно сильно поглощает коротковолновый свет, то есть в синей области спектра, а большую часть длинноволнового (красного) света пропускает.

При исследовании света, прошедшего через раствор оксигенированного гемоглобина, с помощью спектроскопа можно обнаружить не только полосу поглощения в синей области спектра (полосу Соре), но также две характерные темные полосы (полосы поглощения) в желтой и желто-зеленой областях спектра с максимумами при длинах волн 577 и 541 нм.

Дезоксигемоглобин несколько интенсивнее, чем оксигемоглобин, поглощает длинноволновые лучи и менее интенсивно — коротковолновые. В связи с этим венозная кровь выглядит темнее и имеет красный цвет с синеватым оттенком. При спектроскопическом исследовании выявляется одна широкая полоса поглощения в желто-зеленой части спектра с максимумом при длине волны 555 нм.

Спектрофотометрия. Для количественного анализа абсорбционных свойств окрашенного раствора используют спектрофотометры. Отношение I/I0 называется пропусканием, а отношение (I0 – I)/I0 — поглощением. Полный спектр поглощения раствора получают путем последовательного измерения этих величин для разных длин волн.