21.6.2.4. Определение группы крови в системе АВ0
Принцип метода: для определения групп крови используется явление агглютинации исследуемой крови со стандартными сыворотками. При встрече одноименных агглютиногенов и агглютининов (А+a; В+b) происходит агглютинация эритроцитов.
Для определения групп крови используются сыворотки I, II, III групп двух серий. Реакцию проводят при комнатной температуре. Соотношение сыворотки и эритроцитов — 10:1. Разными палочками размешивают каплю крови с сывороткой до равномерного розового цвета. Если происходит реакция агглютинации, капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группа крови устанавливается по наличию или отсутствию агглютинации. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы двух серий должны совпадать. Трактовка результатов (табл. 21.4):
- агглютинация не наступила ни в одной капле сывороток — группа крови 0 (I);
- агглютинация произошла с сыворотками I и III групп — группа крови A (II);
- агглютинация наступила с сыворотками I и II групп — группа крови В (III);
- агглютинация наступила с сыворотками I, II и III групп; для исключения неспецифической агглютинации необходимо провести реакцию с сывороткой IV группы; если агглютинация не наступит, исследуемая кровь AB (IV) группы.
В настоящее время рекомендована методика определения групп крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В, которая имеет более высокую специфичность и выраженность реакции агглютинации, поэтому можно пользоваться одной серией реагентов.
В углубления планшеты двумя пипетками наносят по капле цоликлонов анти-А и аити-В, рядом с каплями антител наносят по маленькой капле крови (в 10 раз меньше капли цоликлонов) и капли смешивают. Результат реакции оценивают в течение 2,5 мин. Трактовка результатов (см. табл. 21.4):
- агглютинации нет ни с цоликлоном анти-А, ни с цоликлоном анти-В — группа крови 0 (I);
- агглютинация только с цоликлоном анти-А — группа крови А (II);
- агглютинация только с цоликлоном анти-В — группа крови В (III);
- агглютинация имеется как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В — группа крови AB (IV); в этом случае для исключения спонтанной агглютинации необходимо провести контрольное исследование крови путем добавления капли изотонического раствора натрия хлорида, в котором агглютинация должна отсутствовать.
Таблица 21.4. Реакции агглютинации эритроцитов при определении групп крови
Группа крови | С использованием стандартных сывороток | С использованием цоликлонов |
I (a, b) | II (b) | III (a) | цоликлон анти-А | цоликлон анти-В |
0 (I) | – | – | – | – | – |
A (II) | + | – | + | + | – |
B (III) | + | + | – | – | + |
AB (IV) | + | + | + | + | + |