Поиск
Озвучить текст Озвучить книгу
Изменить режим чтения
Изменить размер шрифта
Оглавление
Для озвучивания и цитирования книги перейдите в режим постраничного просмотра.

Глава 6. Инженерная энзимология

Инженерная энзимология — это одно из направлений в биотехнологии, которое основано на использовании ферментов (или ферментных систем), в изолированном виде или в структуре живых клеток, в качестве катализаторов с целью получения определенных целевых продуктов. Внедрение в производство таких биотехнологических продуктов, как ферменты, резко повысило его возможности и качество. Однако существует проблема нестабильности ферментов; изолированные ферменты быстро теряют активность из-за незащищенности системами клеточного гомеостаза организма, в который они внедрены. Проблема нестабильности решена путем создания так называемых «промышленных биокатализаторов» — иммобилизованных ферментов. В данном случае под иммобилизацией подразумевают связывание фермента с нерастворимым носителем при сохранении каталитической­ активности фермента.

Иммобилизованные ферменты обладают рядом преимуществ:

  • являясь гетерогенными катализаторами, с легкостью отделяются от реакционной среды, могут использоваться неоднократно и обеспечивают непрерывность каталитического процесса;
  • процесс иммобилизации ведет к изменению свойств фермента, что позволяет регулировать субстратную специфичность, устойчивость, зависимость активности от условий среды;
  • иммобилизованные ферменты долговечны и во много раз стабильнее свободных энзимов.

Все перечисленные свойства обеспечивают высокую эффективность, экономичность и конкурентоспособность технологий, которые используют иммобилизованные ферменты.

Носители для иммобилизации ферментов

Материалы, используемые в процессе иммобилизации ферментов, должны обладать следующими характеристиками: высокой биологической и химической стойкостью, нерастворимостью, гидрофильностью, про­ницаемостью для ферментов и коферментов, субстратов и продуктов реакции, быстрой активацией носителя (переход в реакционно-способную форму).

Носители для процесса иммобилизации ферментов делятся на органические и неорганические (рис. 6.1).

Рис. 6.1. Классификация носителей для иммобилизации ферментов

Органические полимерные носители. Все органические полимерные носители, которые существуют на данный момент, можно разделить на синтетические и природные. Следует отметить, что синтетические и природные носители дополнительно подразделяют в зависимости от их строения.

Среди природных полимеров выделяют липидные, белковые и полисахаридные носители, а среди синтетических — полиамидные, полиметиленовые и полиэфирные. Природные носители обладают рядом преимуществ, а именно полифункциональностью, доступностью и гидрофильностью, но наряду с этим имеют и недостатки — био­деградируемость и высокую стоимость.

Из полисахаридов в процессе иммобилизации часто используют декстран, целлюлозу, агарозу и их производные. Для придания устойчивости химической структуре линейные цепи декстрана и целлюлозы поперечно сшивают эпихлоргидрином. Сетчатые структуры, полученные путем сшивания, используют для введения различных ионогенных группировок. Химической модификацией крахмала сшивающими агентами (глутаровый альдегид, формальдегид, глиоксаль) синтезирован новый носитель — губчатый крахмал, который обладает высокой устойчивостью к гликозидазам.

Из природных аминосахаридов в качестве носителей в процессе иммобилизации применяют хитин, накапливающийся в значи­тельных количествах в виде отходов в результате промышленной пе­реработки представителей ракообразных (креветки, крабы). Хитин обладает химической стойкостью и имеет ярко выраженную пористую структуру.

В качестве носителей практическое применение среди белков нашли структурные протеины: кератин, коллаген, желатин (продукт переработки коллагена). Перечисленные белки широко распространены в природе, что объясняет их доступность в значительных количествах, дешевизну и наличие большого числа функциональных групп для связывания фермента. Следует отметить способность белков к биодеградации, что необходимо при конструировании иммобилизованных ферментов в медицинских целях. К недостаткам белков как носителей относят их высокую иммуногенность.

Наряду с природными носителями в инженерной энзимологии широко используются синтетические полимерные носители благодаря их многообразию и доступности. К синтетическим носителям относятся полимеры на основе стирола, поливинилового спирта, акриловой кислоты; полиуретановые и полиамидные полимеры. Многие синтетические полимерные носители механически прочны, но при образовании обладают способностью обеспечивать варьирование в широких пределах величины пор и тем самым дают возможность поступления различным функциональным группам. Часть синтетических полимеров может быть произведена в различных формах: гранулы, волокна, трубы. Все перечисленные свойства полезны для разных способов иммобилизации ферментов.

Носители неорганической природы. В качестве неорганических носителей чаще всего применяют материалы из глины, стекла, керамики, силикагеля, графитовой сажи; кроме этого, могут использоваться силохромы и оксиды металлов. Особенностью неорганических носителей является то, что они могут быть подвержены химической модификации, с этой целью они покрываются пленкой оксидов алюминия, циркония, титана или обрабатываются органическими полимерами. Следует отметить, что основным преимуществом неорганических носителей является легкость регенерации; кроме этого, подобно синтетическим полимерам, они могут быть произведены в любой форме и получить их можно с разной степенью пористости.

Таким образом, к настоящему моменту создано значительное количество разных носителей для иммобилизации ферментов. Однако для каждого индивидуального энзима, который используется в определенном технологическом процессе, должны подбираться приемлемые варианты как носителя, так и способов и условий иммобили­зации.

Методы иммобилизации ферментов

Методы иммобилизации ферментов разделяют на две группы: физические методы — без образования ковалентных связей между энзимом и носителем; и химические методы иммобилизации — с возникновением ковалентной связи между ними (рис. 6.2).

Рис. 6.2. Методы иммобилизации ферментов: Ф — молекула фермента

Реализация физических методов иммобилизации ферментов осуществляется посредством адсорбции энзима на нерастворимом носителе путем включения его в поры поперечно-сшитого геля, в полупроницаемые структуры или двухфазные системы.

Адсорбция ферментов на нерастворимых носителях. При адсорбционной иммобилизации молекула белка удерживается на поверхности носителя за счет гидрофобных, электростатических, дисперсионных взаимодействий и водородных связей. Для определения эффективности адсорбции белковой молекулы на носителе необходимо учитывать удельную поверхность (плотность центров сорбции) и пористость носителя. Следует отметить, что процесс адсорбции ферментов на носителях, относящихся к нерастворимым, крайне прост и достигается при контакте водного раствора энзима с носителем. При таком варианте иммобилизации активность фермента сохраняется практически на уровне 100%.

Для продолжения работы требуется Registration
На предыдущую страницу

Предыдущая страница

Следующая страница

На следующую страницу
Глава 6. Инженерная энзимология
На предыдущую главу Предыдущая глава
оглавление
Следующая глава На следующую главу

Table of contents

Данный блок поддерживает скрол*