Весь технологический процесс при использовании иммуногистохимического метода можно условно разделить на три этапа:
- преаналитический;
- аналитический;
- постаналитический.
Преаналитический этап включает забор материала, фиксацию, приготовление парафиновых блоков и хранение архивного материала, а также получение срезов на микротоме и подготовку стекол со срезами к окраске.
Аналитический этап состоит из работы со срезами от момента депарафинизации до заключения под покровное стекло.
Постаналитический этап — это оценка окрашенных срезов, сопоставление результатов окраски с контрольными образцами, а также все последующие этапы работы, включающие интерпретацию результатов исследования и построение окончательного патологоанатомического диагноза с учетом базового морфологического метода.
Выявление антигенов в клетках и тканях с помощью иммуногистохимии — это сложный многоступенчатый процесс. Исследуемые образцы заключаются в парафин, режутся на микротоме и помещаются на предметные стекла. Затем срезы освобождаются от парафина, на них проводят демаскировку антигенов, блокируют неспецифическое связывание белков и эндогенную пероксидазную активность, выполняют инкубацию с первичными антителами. Связавшиеся первичные антитела выявляют, добавляя вторичные антитела, конъюгированные при помощи полимера с пероксидазой хрена, и осуществляют визуализацию вторичных антител при помощи субстрата — диаминобензидина. После достижения максимальной интенсивности окрашивания срезы промывают водой для прекращения реакции, докрашивают гематоксилином и заключают в заливочную среду.
Для ИГХ пригоден практически любой материал: цитологические мазки, свежезамороженная или фиксированная ткань. Выбор метода исследования определяется диагностическими задачами.