Термины на русском языке
2,3-дифосфоглицерат — промежуточный компонент гликолиза, с содержанием которого коррелирует кислородтранспортная функция эритроцита.
Агглютинация (от лат. agglutinatio — склеивание) — склеивание в комочки и выпадение в осадок из однородной взвеси бактерий, клеточных элементов крови и др. Агглютинация происходит под воздействием особых веществ антител — агглютининов, которые вырабатываются лимфоцитами и накапливаются в сыворотке крови человека или животных при различных инфекционных заболеваниях либо иммунизации. Реакция агглютинации используется для определения групп крови, вида и типа микробов многих инфекционных заболеваний и т.п.
Взаимодействие антигенов эритроцитов и антител к ним проявляется реакцией агглютинации.
Картина агглютинации определяется концентрацией взаимодействующих структур:
- при избытке антител агглютинаты не образуются вследствие отсутствия свободных эпитопов («прозона»);
- при приблизительно равном соотношении антигенных детерминант и молекул антител развивается видимая агглютинация («зона эквивалентности»);
- при дефиците антител агглютинаты не образуются вследствие связывания единичных молекул иммуноглобулинов с отдельными клетками («постзона»).
Кроме того, наличие антител к эритроцитам может проявляться гемолизом вследствие разрушения мембраны комплементом, активированным комплексом антиген–антитело. Опосредованный антителами гемолиз не развивается в отсутствие комплемента или в плазме, содержащей кальций-связывающий антикоагулянт (цитрат, этилендиаминтетраацетат). При условии, что изначально сыворотка не была гемолизированной и при тестировании не добавлялись гемолитические агенты, гемолиз в супернатанте — признак реакции антиген–антитело (табл. 2.1).
Таблица 2.1. Интерпретация реакций агглютинации
| Выраженность реакции | Степень | Величина, баллы | Проявления |
| 4+ | Полная | 12 | Единый агглютинат. Свободные эритроциты не обнаруживаются |
| 3+ | 3+ | 10 | Выраженная агглютинация. Много больших агглютинатов |
| 2,5+ | 3+w или 2+s | 9 | Большие агглютинаты, единичные скопления клеток |
| 2+ | 2+ | 8 | Большие агглютинаты среди меньших скоплений клеток. Свободные эритроциты не обнаруживаются |
| 2+w | 2+w | 7 | Много средних и малых агглютинатов. Свободные эритроциты не обнаруживаются |
| 1,5+ | 1+s | 6 | Много средних и малых агглютинатов. В нижнем слое — свободные эритроциты |
| 1+ | 1+ | 5 | Много малых агглютинатов на фоне свободных эритроцитов |
| 1+w | 1+w | 4 | Много очень малых агглютинатов среди множества свободных эритроцитов |
| 0,5+ или – | ± | 3 | Слабая зернистость суспензии эритроцитов. При макроскопии — несколько агглютинатов. При микроскопии — множество агглютинатов |
| Следы (микро) | (+) Микро | 2 | При макроскопии — нет агглютинации. При микроскопии — в большинстве полей зрения небольшое число агглютинатов из 6–8 клеток |
| Неопределенная | (0r)
Приблизительно | 1 | При микроскопии — единичные агглютинаты |
| 0 | 0 | 0 | Суспензия одинаковых эритроцитов. Агглютинаты не обнаруживаются |
Примечание.
1. Микро — при микроскопии; макро — при макроскопии.
2. Для взбалтывания осевшего агломерата эритроцитов со дна пробирки нужно аккуратно перемешать или перевернуть пробирку.
3. После оценки степени разрушения агломерата эритроцитов и полного ресуспендирования клеток оценивают степень агглютинации в соответствии с данными таблицы.
4. Следует оценить и описать характер агглютинации. Должны быть особо отмечены расплывчатые, «волокнистые», неоднородные и распадающиеся агглютинаты, наличие которых может иметь ключевое диагностическое значение при сложных клинических ситуациях.
w (weak) — слабый; s (strong) — сильный; r (rough) — грубый.
Методы, основанные на реакции агглютинации, наиболее распространены в практике службы крови.
Фактически реакция агглютинации протекает в две стадии:
- сенсибилизация — соединение антител с антигенами мембраны эритроцита;
- гемагглютинация — соединение сенсибилизированных клеток в видимые агглютинаты.
Это разделение довольно условно и полезно для понимания процесса, происходящего in vitro. Фактически обе стадии протекают одновременно, и гемагглютинация начинается до завершения сенсибилизации.
Результат реакции агглютинации зависит от ряда условий:
- соблюдения адекватного соотношения концентраций антигенов и антител — для создания «зоны эквивалентности»;
- рН. Большинство антител к антигенам эритроцитов реактивны при величине рН от 6,5 до 7,5. Обычно используется рН 7,0;
- ионная сила. Ионы Na+ и Cl– в обычном изотоническом растворе натрия хлорида отчасти нейтрализуют электрический заряд активных участков антигенов и антител. При снижении ионной силы среды этот нейтрализующий эффект уменьшается. Кроме того, низкая концентрация ионов способствует ускорению образования комплекса антиген–антитело. Поэтому в иммуногематологической практике широко распространено использование раствора низкой ионной силы — в качестве «усиливающего» реагента;
- температура. Антитела к антигенам групп крови различаются по температурному оптимуму реагирования. Антитела класса IgM лучше реагируют при температуре от +4 до +27 °С, антитела класса IgG лучше реагируют при температуре +37 °С. Антитела, реагирующие in vitro только при температуре менее +37 °С, как правило, не вызывают разрушения эритроцитов и не имеют клинического значения;
- время. Слишком ранний учет результатов чреват тем, что реакция еще не произошла. При затянутой инкубации может произойти диссоциация иммунных комплексов. При использовании «усиливающих» реагентов, например раствора низкой ионной силы (LISS), оптимальное время инкубации сокращается;
- учет класса антител. Как обсуждалось выше, антитела класса IgM активнее индуцируют агглютинацию, чем антитела класса IgG;
- учет возможности недостаточной экспрессии антигенов. В ряде случаев возможно, что на мембране эритроцита экспрессировано незначительное количество молекул антигена либо антиген «погружен» в липидный бислой;
- электростатическое отталкивание эритроцитов. Эритроциты отталкиваются вследствие отрицательного поверхностного заряда («ζ-потенциала»). Для преодоления этого эффекта используют: 1) обработку клеток протеолитическими ферментами; 2) добавление коллоидов в реакционную среду; 3) центрифугирование.