Проведение гистохимического исследования прежде всего включает постановку гистохимической реакции, куда также входит выполнение ряда подготовительных процедур (взятие материала с его последующей фиксацией и промывкой). Заключительные этапы гистохимического анализа - оценка результатов самой реакции и их статистическая обработка.
Характер предварительных процедур зависит от типа гистохимической реакции. При постановке реакции на ферменты следует учитывать их чувствительность к фиксатору, способ локализации в клетке или ткани, а также способность к сохранению активности в период после взятия материала. Например, большинство дегидрогеназ чувствительно к фиксирующим агентам, поэтому их лучше изучать на нефиксированных тканях, тогда как ферменты-гидролазы относительно устойчивы к действию многих фиксаторов, но даже в этом случае конкретный выбор фиксатора будет зависеть от специфики локализации фермента. Кроме того, при работе с нефиксированными тканями иногда приходится принимать меры для предотвращения диффузии ферментов во внеклеточную среду во время инкубации.
2.1. ПОСТАНОВКА ГИСТОХИМИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ
Взятие материала необходимо проводить с максимальной быстротой, для сохранения структуры ткани. С этой же целью проводится фиксация взятого материала. Кусочки ткани, толщина которых, по возможности, не должна превышать 5 мм, погружают в фиксирующий раствор (спирт, формалин или сложные фиксаторы).
В тех случаях, когда ткани первоначально не обрабатываются фиксатором, они обязательно подвергаются замораживанию (в жидком азоте или под действием других агентов). Эта процедура приводит к мгновенному ингибированию обменных процессов в тканях, препятствует их разрушению, а затвердевание ткани способствует приготовлению срезов. Замороженные образцы ткани далее нарезаются в криостате или на замораживающем микротоме. Оптимальная температура для нарезки нефиксированного материала - от -10 до -25 °С (для тканей с высоким содержанием липидов - от -30 до -35 °С).