Поиск
Озвучить текст Озвучить книгу
Изменить режим чтения
Изменить размер шрифта
Оглавление
Для озвучивания и цитирования книги перейдите в режим постраничного просмотра.

МОДУЛЬ 4. БАКТЕРИОФАГИ. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цели модуля

• Знать: структуру бактериофага и его свойства; свойства генома бактерий; молекулярно-генетические методы обнаружения и идентификации микроорганизмов.

•  Уметь: проводить фаго- и колицинотипирование бактериальной культуры.

•  Владеть: знаниями об условиях применения молекулярно-генетических методов исследований.

4.1. БАКТЕРИОФАГИ

4.1.1. Получение фаголизатов

Принцип метода. Для получения лизата фага чувствительные бактерии заражают фагом и инкубируют, чтобы произошло размножение фага в бактериальной клетке с последующим ее лизисом. Для окончательного разрушения клеточной стенки добавляют хлороформ. Затем проводят центрифугирование. Отбирают надосадочную жидкость (фаголизат), которую хранят на холоде в закрытой резиновой пробкой пробирке или пробирке с завинчивающейся крышкой.

Методика

•  0,2 мл бульонной культуры E. coli засевают в 20 мл L-бульона (1% пептон, 0,5% дрожжевой экстракт, 0,5% раствор натрия хлорида при температуре 37 °С, 0,1% глюкоза) и аэрируют в течение 2,5 ч при температуре 37 °С до достижения концентрации 108 клеток/мл.

• Добавляют фаголизат в соотношении 1:10 и продолжают аэрацию до тех пор, пока культуральная среда не просветлеет.

• Добавляют несколько капель хлороформа, встряхивают, оставляют на несколько минут.

•  Проводят центрифугирование при 3000 об./мин в течение 25 мин. Отбирают надосадочную жидкость.

4.1.2. Определение титра фага методом агаровых слоев по Грацию

Принцип метода. На поверхность плотного слоя питательного агара в чашке Петри наносят смесь фаголизата и чувствительной бактерии в полужидком агаре. Чашку инкубируют. За время инкубации каждая бактерия, присутствующая в посевном материале, образует маленькую колонию, и на поверхности агара образуется сплошной рост бактерий. Фаговые частицы, присутствующие в смеси, заражают бактерии, размножаются в них и лизируют бактериальные клетки, из которых высвобождается новое поколение фагов. Этим фаги заражают соседние бактерии. Процесс размножения фага и бактериального лизиса повторяется снова и снова, таким образом, на бактериальном газоне появляются зоны лизиса в виде бляшек. При низкой множественности заражения каждая бляшка (стерильное пятно) образуется одной фаговой частицей.

Для продолжения работы требуется Registration
На предыдущую страницу

Предыдущая страница

Следующая страница

На следующую страницу
МОДУЛЬ 4. БАКТЕРИОФАГИ. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
На предыдущую главу Предыдущая глава
оглавление
Следующая глава На следующую главу

Table of contents

Данный блок поддерживает скрол*