Поиск мутаций гена PAH
Комментарий: вне зависимости от диагностической концентрации ФА, наиболее частой (98%) причиной всех ГФА являются мутации в гене PAH. Поиск мутаций гена PAH является молекулярно-генетическим исследованием, которое следует назначать в первую очередь. Исключением являются пациенты с проведенным исследованием птеринов мочи или крови, по результатам которого можно однозначно заподозрить BH4-дефицитную ГФА.
1.Поиск частых мутаций гена PAH
Исследование кодирующей последовательности гена PAH (секвенирование по Сенгеру или массовое параллельное секвенирование с последующим подтверждением результатов методом секвенирования по Сенгеру)
2.Поиск делеций и дупликаций гена PAH (метод MLPA)
Комментарий: В случае не обнаружения одной или обеих мутаций гена PAH после поиска частых мутаций (a) последовательно назначаются исследования (b), (c). Если в результате полного исследования гена PAH обе мутации не были обнаружены, следует проводить исследование генов по алгоритму ниже.
3. Поиск мутаций в генах PTS, QDPR, GCH1, PCBD1, SPR, DNAJC12
Комментарий: В случае наличия результатов биохимических исследований, подтверждающих наличие у пациента определенной формы BH4-дефицитной ГФА, можно приступить сразу к исследованию соответствующего гена. В противном случае, рекомендуется проводить исследование генов в указанной последовательности: PTS, QDPR, GCH1, PCBD1, SPR, DNAJC12 (по частоте встречаемости). В случае использования методом массового параллельного секвенирования возможно исследование вышеперечисленных генов одновременно. Необходимо отметить, что все результаты, полученные с использованием методов массового параллельного секвенирования, не могут использоваться в клинической практике без подтверждения результатов референсным методом (секвенирование по Сенгеру для точечных нуклеотидных замен), а также семейного анализа сегрегации выявленных вариантов (определение цис- или транс- положения для аутосомно-рецессивных заболеваний).