5.1 Современные методы и технологии микробиологической и молекулярно-генетической диагностики туберкулеза
Методы микроскопии
Диагностическая чувствительность метода микроскопии обычно составляет не более 50% среди впервые выявленных больных ТБ легких, однако если говорить о наиболее инфекционно-опасных больных (у которых бактериовыделение подтверждено культуральным методом), диагностическая чувствительность метода микроскопии в этом случае достигает 90%.
Методы микроскопии не позволяют дифференцировать МБТ от НТМБ и дают возможность выявлять КУМ только при наличии по крайней мере 5 000-10 000 бактериальных клеток в 1 мл мокроты.
В настоящее время методы микроскопии, обладающие относительно невысокой чувствительностью, тем не менее сохраняют свою актуальность, так как позволяют быстро и с минимальными финансовыми затратами выявлять наиболее эпидемически значимых больных ТБ и оценивать массивность бактериовыделения.
Методы микроскопии в обязательном порядке включаются во все схемы обследования пациентов в связи с необходимостью определения статуса бактериовыделения согласно классификатору заболеваний и дальнейшему диспансерному наблюдению пациента или при необходимости его целевой госпитализации в специализированное отделение противотуберкулезных учреждений.
| | Методы микроскопии настоятельно рекомендуется включать в алгоритм микробиологической диагностики тб |
Современные методы микроскопии требуют обучения персонала.
Микроскопия с окраской по Цилю – Нельсену
Световая микроскопия препаратов с окраской по ц – Н, приготовленных непосредственно из нативных образцов мокроты или других диагностических материалов, доступна для лабораторий всех уровней. В БЛ медицинских организаций фтизиатрического профиля субъекта РФ данный метод является актуальным при необходимости экстренного (в течение 1 ч) выявления больных ТБ и микобактериозом на первичном этапе обследования до госпитализации с целью определения статуса бактериовыделения.
Идентификация выросших микроорганизмов микроскопией с окраской по Цилю-Нельсену
При получении роста культуры микроорганизмов на плотной и/или жидкой питательных средах необходимо провести ее идентификацию, а также исключить наличие контаминации посторонней микрофлорой.
Метод окраски по ц – Н может быть использован для идентификации выросших микроорганизмов при отсутствии возможности использования современных молекулярных методов.
Методы люминесцентной микроскопии
В БЛ медицинских организаций фтизиатрического профиля субъекта РФ в качестве основного метода микроскопического исследования рекомендуется применять методы люминесцентной микроскопии, где в качестве источника излучения может использоваться ртутная лампа или светодиодный излучатель (LED).
Основное преимущество люминесцентной микроскопии перед микроскопией с окраской по ц – Н состоит в экономии времени, затрачиваемого на просмотр препарата, за счет использования меньших увеличений объектива и, соответственно, возможности просматривать большую площадь мазка в поле зрения.
Диагностическая чувствительность микроскопии с окраской люминесцентными красителями в среднем на 10% выше, чем микроскопии с окраской по ц – Н, однако метод люминесцентной микроскопии требует значительной технической компетенции, а также более высоких капиталовложений и расходов.
Светодиодная (LED) микроскопия
LED-технология позволяет сделать микроскопию более доступным анализом за счет более низкой стоимости как самих микроскопов, так и их сервисного обслуживания.
Оценка, проведенная ВОЗ, подтвердила диагностическую точность LED- микроскопии по сравнению с традиционной люминесцентной микроскопией и большую эффективность LED по сравнению с микроскопией по ц – Н. Поэтому можно рекомендовать заменять традиционную люминесцентную микроскопию LED-микроскопией, которая в качестве альтернативы традиционной световой микроскопии по ц – Н может применяться как в крупных, так и в небольших лабораториях.
В связи с тем, что светодиодные люминесцентные микроскопы не требуют высококвалифицированного технического обслуживания и имеют значительно больший срок службы ламп по сравнению с обычными моделями люминесцентных микроскопов, применение данного метода является оправданным с экономической точки зрения и позволяет широко распространить технологию люминесцентной микроскопии для диагностики ТБ.
| | Метод светодиодной люминесцентной микроскопии (LED) может быть рекомендован к применению вместо традиционной микроскопии |
Культуральные методы
Культуральные методы диагностики (методы посева диагностического материала на питательные среды с последующей идентификацией выросших микроорганизмов) являются основными методами выделения МБТ. Их специфичность превышает таковую микроскопических методов, а предел обнаружения значительно выше: он позволяет выявить МБ при наличии в 1 мл исследуемого диагностического материала нескольких сотен и даже десятков жизнеспособных микроорганизмов.
При культивировании используют разные по составу питательные среды, дающие разные возможности роста МБТ. Культивирование МБ обеспечивает точную диагностику ТБ, значительно увеличивая число случаев выявления возбудителя и позволяя подтвердить достоверность поставленного диагноза «туберкулез».
Диагностическая чувствительность культурального метода достигает 70-80% среди впервые выявленных больных ТБ легких.
С помощью культурального метода удается выявить на 20-40% больше случаев ТБ с бактериовыделением по сравнению с методом микроскопии среди впервые выявленных больных. Культуральный метод позволяет выделить культуру возбудителя, необходимую для определения его видовой принадлежности и определения спектра и степени ЛУ.