12. Определение чувствительности бактерий к дезинфицирующим средствам при дезинфекции различных поверхностей

Приготовление бактериальной взвеси

1. Культуры микроорганизмов, выращенные на плотной питательной среде в течение 18 – 24 часов, смыть стерильным изотоническим раствором хлорида натрия.
2. Бактериальную суспензию каждого микроорганизма довести мутности, соответствующей концентрации 5 х 10⁸ клеток/мл, что соответствует 5 единицам по стандарту мутности для оптической стандартизации бактерий (ГИСК им. Тарасевича Л.А.) или 1,5 единицам Мак-Фарланда (изме- рение денситометром согласно данным фирмы-изготовителя стандартов Мак-Фарланда bioMerieux) или теоретической оптической плотности 0,375 (концентрация BaSO₄ 7,2 х 10^-5 моль/л) (измерение денситометром при 550 нм).

Проведение исследования

1. На стерильную поверхность тест-объекта площадью 10х10 см² дозатором нанести микробную взвесь в количестве 0,1 мл и распределить стерильным шпателем по всей площади квадрата.
2. После подсыхания микробной взвеси на поверхность мерно нанести 0,9мл раствора дезинфектанта в рабочей концентрации и распределить по поверхности квадрата стерильным шпателем. Дезинфектант применять в концентрациях, указанных в методических рекомендациях по использованию средства (или необходимых для исследования).
3. Экспозиция в течение времени, указанного в методических рекомендациях по применению ДС для данной концентрации при требуемом режиме обработки (на отдельном столе в лабораторном боксе или в ламинарном боксе класса биологической защиты II А).
4. После воздействия дезинфектанта в требуемой экспозиции, на тест- объекты дозатором нанести по 0,5 мл раствора нейтрализатора и равномерно растереть по поверхности. Экспозиция нейтрализатора – 1- 3 секунды.
5. Смыв произвести сухим стерильным тампоном с поверхности тест- объекта.
6. Высев на чашки с плотной питательной средой произвести немедленно этим же тампоном (по 0,1 мл). Чашки с посевами помещаются в термо- стат.
7. Параллельно с проведением опыта ставят контроли:

1. Контроль жизнеспособности микроорганизма (посев микробной культуры на питательную среду);

2. Контроль дезинфектанта без добавления культуры (посев приготовленного раствора дезинфектанта на питательную среду);
3. Контроль полноты нейтрализации дезинфектанта;
4. Контроль контаминации тест-объекта (после нанесения микробной взвеси на тест-поверхность произвести с нее смыв стерильным тампоном с последующим высевом на питательную среду);
5. Контроль стерильности тест-объекта (до нанесения микробной взвеси произвести смыв стерильным тампоном с тест-поверхности с последующим высевом на питательную среду).
6. При наличии устойчивости – контроль чувствительности тест-штаммов микроорганизмов к тестируемым ДС в бактерицидном режиме.

Учет результатов

По истечении времени, необходимого для культивирования микроорганизмов данного вида, провести учет результатов по количеству выросших на чашке Петри колоний. При отсутствии роста увеличивают сроки культивирования микроорганизмов в 2 раза (так, при сроках культивирования 24 ч., оставляют в термостате до 2-х суток). Выросшие колонии подвергают микроскопии.