Своевременное выявление ИК у ВИЧ-инфицированных больных остается сложной задачей, т.к. клинические проявления неспецифичны, а лабораторная диагностика часто затруднена в связи с локализацией патологического процесса и невозможностью выполнения инвазивных процедур из-за тяжести состояния пациента. Кроме того, грибы рода Candida наряду с инфекцией, могут вызывать колонизацию различных биотопов, поэтому результаты лабораторных исследований могут интерпретироваться неоднозначно.
У пациентов с клиническими признаками ИК и факторами риска диагностические мероприятия должны проводиться безотлагательно. Обязательным условием эффективной диагностики ИК является лабораторное подтверждение его микотической природы. Разработано множество методов диагностики ИК, однако самостоятельно ни один из них полностью не отвечает запросам современной медицины.
Классическими методами являются прямая микроскопия, гистологическое исследование тканей и бактериологический методы. Основная сложность заключается в трудности получения биообразцов от пациентов. Образцы тканей и жидкостей из «стерильных» в норме биосубстратов должны быть получены и собраны в асептических условиях для немедленной транспортировки в лабораторию.
Микроскопия препарата включает кроме рутинных (гематоксилиномэозином) специальные методы окрашивания серебром и PAS (перйодной кислотой реактивом Шиффа), требует знаний для интерпретации и не может быть использована для окончательной идентификации гриба [12,23].
Посевы крови и других биосубстратов остаются «золотым стандартом» диагностики ИК (рекомендации ESCMID 2013 г.). Полученные культуры Candida из «стерильных» в норме тканей или жидкостей, как правило, свидетельствует о наличии ИК, тогда как отрицательные результаты посевов, в свою очередь, не исключают ИК. В случае положительного результата посевов необходимо проводить идентификацию вида Candida [12,15]. И хотя культуральные методы обладают высокой чувствительностью (70%) в отношении грибов рода Candida, положительный результат может быть получен лишь на поздних стадиях заболевания [55,57,66]. Другим «минусом» является получение отсроченного результата (в течение 7-10 дней).
Очень важно выявить распространенность процесса, очаги диссеминации, что обусловливает характер лечения (в т.ч. хирургическое вмешательство).
Методы диагностики инвазивного кандидоза:
- микологическое исследование крови на специальных средах (Сабуро, суслоагар) проводят 2 раза в день не менее 3 дней (однократный отрицательный результат не исключает диагноз);
- посев смыва с дистального отдела внутрисосудистого катетера;
- компьютерная томография легких, УЗИ органов брюшной полости, офтальмоскопия;
- биопсия очагов поражения с исследованием материала (микроскопия, посев);
- посев любого стерильного в норме биосубстрата с определением вида возбудителя.
Критерии диагностики:
Кандидемия однократное выделение Candida spp. при посеве крови у больного с признаками системной воспалительной реакции;
ОДК кандидемия в сочетании с высевом возбудителя из глубоких тканей 2-х и более очагов.
Серологические методы диагностики ИК предназначены для выявления циркулирующих в крови грибковых антигенов и антител, но с их помощью невозможно отличить инфекцию от колонизации [103]. Вследствие этого они применяются в качестве вспомогательного метода для диагностики грибковых инфекций у пациентов с высоким риском. Для диагностики кандидоза измеряют содержание в сыворотке крови маннана и антиманнановых антител, причем сочетание этих двух методов имеет чувствительность около 80%, а специфичность 90% [89]. Положительным качеством их является возможность использования в качестве ранней диагностики, до получения посевов, в настоящее время они рекомендованы ESCMID. Однако применение серологических методов у ВИЧ- инфицированных больных проблематично ввиду высокой колонизации данной категории пациентов кандидами.
Молекулярные методы диагностики разработаны на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР), где в режиме реального времени выявляются родои видоспецифичные гены гриба. Положительные результаты являются однозначным подтверждением диагноза ИК, а отрицательные - не исключают его. Возможности применения молекулярно-генетических методов чрезвычайно широки и не ограничиваются лишь диагностикой заболевания. С их помощью устанавливают внутривидовое типирование Candida spp. для определения родства штаммов кандид, выделенных из различных локусов пациентов и внешней среды.
Для диагностики и успешного лечения ИК необходимо не только выявление, но и точная видовая идентификация Candida spp. Она может проводиться биохимическими (тест-система AUXACOLOR2), основанными на ассимиляции сахаров, физико-химическими (MALDI-TOF массспектрометрия) методами с экстракцией белков гриба и сравнении их со стандартом, молекулярными (ДНК-сиквенирование) методами.