Поиск
Озвучить текст Озвучить книгу
Изменить режим чтения
Изменить размер шрифта
Оглавление
Для озвучивания и цитирования книги перейдите в режим постраничного просмотра.

2. ДИАГНОСТИКА

2.1. Методы идентификации S. аureus, MRSA и VISA (VRSA).

S. aureus, как и другие виды стафилококков, представляет собой грамположительные неподвижные кокки, при микроскопии располагаются в виде характерных скоплений — гроздей . Стафилококки не образуют спор, но могут образовывать капсулы . У больных муковисцидозом могут выделяться 3 морфологических типа колоний — мукоидные, не мукоидные и с SCV-фенотипом . Kahl et al . обнаружили, что более чем в 50% случаев от пациентов с муковисцидозом выделяли S. aureus с SCV-фенотипом (small colony variant (SCV) — вариант фенотипа в виде мелких колоний) [88] . Эти микроорганизмы образуют мелкие без гемолиза и пигмента медленно растущие колонии на 5% кровяном и шоколадном плотных агаризованных средах .

Идентификацию S. аureus проводят на селективной среде ЖСА . На основании фенотипических свойств — наличия пигмента и лецитиназной активности штаммы стафилококков относят к виду S. аureus . Для подтверждения принадлежности стафилококка к виду S. аureus также необходимо использовать тест на коагулазу . Летициназоположительные стафилококки, характеризующиеся положительным тестом на коагулазу, относят к виду S. аureus . Коагулазу продуцируют также S. intermedius и S. hyicus, которые редко присутствуют в клиническом материале . В некоторых случаях идентификацию стафилококков до вида можно проводить с помощью коммерческих тест систем, например, Staph 16 (Lachema) и API-Staph (bioMérieux) .

Для идентификации возможно применение также молекулярно-генетических методов (ПЦР, MLST) .

Другим важным моментом в диагностике стафилококковой инфекции является идентификация метициллинрезистентных стафилококков (MRS), среди которых особый интерес представляют MRSA . Для определения устойчивости стафилококков к метициллину обычно используют диско-диффузионный метод [17] . Применяют диски с оксациллином (1 мкг) или цефокситином (30 мкг) . Идентификацию осуществляют на среде Мюллера-Хинтона с добавлением 4% NaCl, инкубируя чашки Петри в течение 24 часов при 370 С . Некоторые исследователи предлагают проводить инкубацию в течение 48 часов при 300 С .

В связи с имеющейся гетерогенностью устойчивости к метициллину ряд исследователей рекомендуют проведение идентификации гена mecA/mecC молекулярно-генетическими методами с использованием ДНК-зондов или амплификацией гена в ПЦР . Данные методы полезны для оценки результатов определения MIC . Например, оксациллинустойчивые изоляты S. aureus с MIC между 2-8 мкг/мл могут содержать как детерминанту гена устойчивости mec, так и продуцировать высокие уровни b-лактамазы . В обоих случаях ванкомицин будет лекарством выбора, однако на b-лактамазные гиперпродуценты можно эффективно воздействовать ингибиторами b-лактамаз (клавулановая кислота, тазобактам) . Поэтому в случае отсутствия mec гена в исследуемом штамме терапевт может использовать не ванкомицин, а другой антимикробный препарат . При выявлении у стафилококков устойчивости к метициллину диско-диффузионным методом и идентификации mecA гена генетическими методами, такие штаммы рекомендуется далее тестировать на устойчивость к ванкомицину, так как большинство VISA и гетеро-VRSA обычно устойчивы к метициллину

Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS) установил, что стафилококки, у которых рост ингибируется 4 и менее mg/mL ванкомицина, являются чувствительными, 8-16 mg/mL — умеренноустойчивыми и 32 и более mg/mL — резистентными . В соответствии с этими показателями в литературе умеренноустойчивые к ванкомицину штаммы S.aureus (МПК ванкомицина = 8 mg/mL) обозначают VISA, а резистентные (МПК = 32 и более mg/mL) — VRSA .

Большинство VISA изолятов первоначально выглядят в виде смешанной популяции, состоящей из различных по морфологии и пигменту колоний . Преобладают большие кремового цвета колонии и маленькие колонии серого цвета . Однако, при тестировании различных по морфологии и цвету колоний на устойчивость к ванкомицину они демонстрируют идентичные профили антибиотикограмм и ДНК при тестировании с помощью пульс-электрофореза .

Центр по контролю и предупреждению заболеваний (CDC) рекомендует 3 критерия для идентификации VISA штаммов: микроразведений в бульоне с концентрациями ванкомицина 8-16 mg/mL, Е-тест с концентрацией ванкомицина равной или более 6mg/mL и рост на коммерческом BHI (сердечно-мозговом) агаре, содержащем 6 mg/mL, в течение 24 часов при 35-37 °С . VISA не легко отличить от чувствительных штаммов с помощью быстрых автоматизированных методов, таких как Microscan панели (Dade Microscan, West Sacramento, CA, USA) или Vitek (Bimerieux) . Однако, постоянные изменения программы в Vitek (Biomerieux) могут улучшать выявление VISA [17] .

Для продолжения работы требуется Registration
На предыдущую страницу

Предыдущая страница

Следующая страница

На следующую страницу
2. ДИАГНОСТИКА
На предыдущую главу Предыдущая глава
оглавление
Следующая глава На следующую главу

Table of contents

Данный блок поддерживает скрол*